蛋白轉染試劑
MCE 國際站：Protein Transfection Reagent
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：20°C，1 年避免反復凍融
簡介：MCE Protein Transfection Reagent 是一種用于轉染蛋白質、抗體以及多肽的陽離子高分子聚合物，可將蛋白直接遞送到細胞內。
概述：MCE Protein Transfection Reagent 是一種用于轉染蛋白質、抗體以及多肽的陽離子高分子聚合物，可將蛋白直接遞送到細胞內。陽離子高分子轉染試劑與蛋白質通過靜電、疏水及氫鍵等非共價相互作用形成的帶正電復合物，附著在帶負電荷的細胞表面，通過質膜融合或內吞作用進入細胞，與核內體結合后將蛋白釋放在細胞質中，從而實現(xiàn)蛋白質的細胞轉染。MCE Protein Transfection Reagent 具有如下優(yōu)點：· 轉染效率高：轉染后 3-12 小時即可進行檢測。對原代細胞和難以轉染的細胞也有很高的轉染效率· 蛋白活性高：與蛋白非共價結合，遞送后的蛋白仍具有較高的生物活性· 適用范圍廣：適用于多種細胞類型，可與蛋白、肽和熒光標記抗體一起使用· 細胞毒性低：作用溫和，生物相容性好· 操作簡便：實驗簡單快速，無需分離、克隆和轉染基因序列
描述：
MCE 蛋白質轉染試劑是一種陽離子脂質混合物，可與蛋白質、肽、抗體和其他生物活性分子復合，從而實現(xiàn)它們直接的細胞內遞送。試劑蛋白復合物附著在帶負電荷的細胞表面，要么直接與膜融合，將捕獲的蛋白質運送到細胞內，要么被細胞內吞，然后與內體融合，將捕獲的蛋白質釋放到細胞質中。
MCE 蛋白轉染試劑的特點
快速蛋白質遞送：孵育后 3 至 12 小時內最佳遞送，對原代細胞和難轉染細胞具有高轉染效率。
高蛋白質活性：遞送復合物是非共價的，使蛋白質和多肽在遞送后保留生物活性。
多功能性：適用于多種細胞，可與蛋白質、多肽和熒光標記抗體一起使用。
低細胞毒性：作用溫和，生物相容性好
省時：無需分離、克隆和轉染基因序列。
操作說明：1.準備待轉染細胞(1)貼壁細胞：轉染前一天，將消化后的細胞按照每孔 1-3 × 105 個細胞進行鋪板，確保轉染時密度為 50%-100%。(2)懸浮細胞：轉染當天，配制轉染試劑-蛋白復合物之前，先進行細胞鋪板，每 500 μL 生長培養(yǎng)基中加入 2-6 × 105 個細胞。注：為提高轉染效率，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 > 90% 的細胞進行轉染。2.準備轉染試劑-蛋白復合物(1)取 1-10 μg 蛋白加入到 1.5 mL 離心管中，加入 1-3 μL MCE Protein Transfection Reagent，輕柔混合均勻，室溫靜置孵育 3 min。注：蛋白質實際用量需根據(jù)蛋白種類及實驗類型進行優(yōu)化。最佳轉染條件因細胞類型和培養(yǎng)條件不同而有所區(qū)別（如熒光蛋白 GFP 建議用量 5-10 μg，熒光蛋白 Phycoerythrin 建議用量 0.5-2 μg，凋亡蛋白 Saporin 建議用量 0.1-1 μg），可做預實驗摸索蛋白最佳用量。轉染試劑的體積應根據(jù)蛋白濃度和培養(yǎng)皿的大小進行調整注：細胞轉染時，可根據(jù)實際情況參考上表進行等倍放大。(2)加 100 μL 無血清培養(yǎng)基 1，輕柔混勻，室溫靜置孵育 20 min，即為轉染試劑-蛋白復合物。(3)加 400 μL 無血清培養(yǎng)基 2稀釋轉染試劑-蛋白復合物，輕柔混勻。3.細胞轉染轉染試劑-蛋白復合物孵育期間，棄去細胞培養(yǎng)基，用 37°C 預熱的無血清培養(yǎng)基或 1 × PBS 洗滌 2-3 次。將轉染試劑-蛋白復合物 (500 μL) 輕輕滴加到每孔細胞中，輕柔混勻，培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。4.分析轉染效率培養(yǎng) 3-12 h 后，可根據(jù)實驗需要選用熒光檢測法、Western Blot、ELISA、RT-PCR、流式細胞術、報告基因、免疫熒光染色等方案檢測分析轉染效果。注：培養(yǎng) 3 h 后補充轉染液或棄去轉染液用培養(yǎng)基替代（可選）；再檢測或可視化之前，可先用 37°C 預熱的無血清培養(yǎng)基或 PBS 洗滌細胞 3-4 次，去除可能影響檢測結果的未轉染蛋白。
注意事項：1.為了獲得較高的轉染效率，建議選用高純度、高活性的蛋白。2.細胞狀態(tài)會極大影響轉染效率，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 > 90% 的細胞進行蛋白轉染。3.血清會對轉染效果產生一定程度的干擾，為提高轉染效率，轉染過程中，建議使用無血清培養(yǎng)基。4.細胞暴露在轉染混合物中的時間長度將影響轉染效率。最佳的蛋白質遞送時間需要摸索確定。一般情況下，肽和小分子蛋白在 2 h 左右進入細胞，大多數(shù)酶和中等大小的蛋白質在 3-3.5 h 轉移到細胞中，大分子蛋白質、抗體或多聚體蛋白可能需要 5 h 或更長時間才能有效遞送。5.本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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