Stbl4 感受態(tài)細胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC115-01
Stbl4 Competent cells 20×100μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl
儲存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品說明：
Stbl4 菌株來源于 Stbl2 菌株（Stbl2 為 JM109 衍生菌株），用于克隆不穩(wěn)定序列（如重復(fù)序列，逆轉(zhuǎn)錄病毒
序列等）和甲基化的 DNA 序列，特別適合構(gòu)建重組逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒質(zhì)粒?？捎糜诖筚|(zhì)粒的構(gòu)建和擴增，
適用于構(gòu)建和擴增質(zhì)粒 cDNA 文庫。區(qū)別于 Stbl2 菌株，Stbl4 菌株在 IPTG 和 X-gal 存在的條件下，可進行α互
補原理的藍白斑篩選實驗。感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率大于 108 cfu/μg。
基因型：
mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1endA1gyrA96gal-thi-1supE44 λ- relA1 Δ(lac-proAB)/F′ proAB+ lacIqZΔM15
Tn10 (TetR )
菌株抗性：對氨芐，，敏感，對四環(huán)素有抗性。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：
1. 將感受態(tài)細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入質(zhì)粒 DNA 或 5-10μl 連接產(chǎn)物到細胞中，用手
指管底，輕輕混勻；
2. 冰水浴中放置 15-30 分鐘，不要晃動；
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動；
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動；
5. 加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基；
6. 置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘；
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。
（當(dāng)克隆不穩(wěn)定片段時，為了降低重組錯誤率，復(fù)蘇培養(yǎng)和涂布培養(yǎng)采用 30℃的培養(yǎng)條件，平板在 30℃
培養(yǎng)時需要 24 小時左右。）
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸
頭輕輕吹打散菌塊，取 10μl 重懸的菌液分多點滴在抗性 LB 平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平
板上的液體來回劃線。37℃培養(yǎng)過夜。這個方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）


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