化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
李斯特菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Listeria spp. |
貨號 | CP934411 |
產(chǎn)品特征:
李斯特菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，產(chǎn)品僅用于科研使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是李斯特菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
二化烯細(xì)胞糖類總量鐵化物比色法定量檢測試盒
二氰化烯組織糖類總量鐵化物比色法定量檢測試盒
二氧化二烯血液糖類總量鐵化物比色法定量檢測試盒
反-1,2-二烯體液糖類總量鐵化物比色法定量檢測試盒
反式-1,2-雙(二苯膦基)烯植物糖類化物比色法定量檢測試盒
反式-1.2-二烯糖類總量硫酸-苯酚比色法定量檢測試盒
反式-1-基-2-戊基烯糖類總量氨基苯硫酚熒光定量檢測試盒
反式-2-基-1,3-戊二烯細(xì)菌多聚糖PURPALD比色法定量檢測試盒
反式-2-辛烯細(xì)胞游離脂肪酸酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試盒
反式-3-壬烯組織游離脂肪酸酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試盒
反式-β-硝基苯烯血清/血漿游離脂肪酸酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試盒
過烯游離脂肪酸化學(xué)比色法定量檢測試盒
環(huán)庚三烯PH0-2顯色（BRILLIANT GREEN）指示溶液
環(huán)己烯基烯PH2-3顯色（CRESOL RED）指示溶液
李斯特菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒環(huán)戊烯并環(huán)庚烯PH3-4顯色（METHYL ORANGE）指示溶液 pIE1-neopIE1-neo低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pIC111pIC111低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHY43pHY43低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHY300pHY300低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
Phusion DNA聚合酶Phusion DNA Polymerase-20℃保存250U
pHT43pHT43低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHT315pHT315低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHT304pHT304低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHT01pHT01低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
phRL-TKphRL-TK低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug