詳細介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,抑制非特異性擴增 。
重復(fù)性好:擴增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Enterobacter sakazaki |
貨號 | CP934180 |
阪崎腸桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,產(chǎn)品僅用于科研報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。
以下是阪崎腸桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
2-碘-5-吡啶線粒體復(fù)合物II蛋白免疫共沉淀分析試盒
阿德福韋線粒體復(fù)合物II蛋白表達ELISA定量檢測試盒
2-碘-4-氟苯腈 細胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達流式細胞儀檢測試盒
2-碘-4-三氟基苯酸載玻片細胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達熒光顯微鏡檢測試盒
芐基縮水甘油醚冰凍切片組織線粒體復(fù)合物III蛋白表達熒光顯微鏡檢測試盒
O-(2,4,6-三基苯磺酰基)酰羥肟酸酯石蠟切片組織線粒體復(fù)合物III蛋白表達熒光顯微鏡檢測試盒
3--1,3,4,5-四-2H-1-苯并氮雜卓-2-酮 載玻片細胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試盒
3--4-基吡啶 冰凍切片組織線粒體復(fù)合物III蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試盒
3-氨基-5--2-氧基吡啶 石蠟切片組織線粒體復(fù)合物III蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試盒
辛硫醚 細胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達比色法定量檢測試盒
阪崎腸桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2-氟-6-氨基嘌呤 細胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達熒光定量檢測試盒
3,5-二苯肼鹽酸鹽 線粒體復(fù)合物III蛋白表達西方雜交分析試盒
2,4-二-6,7-二噻吩[3,2-D]嘧啶線粒體復(fù)合物III蛋白免疫共沉淀分析試盒
5--2--4-氧基嘧啶線粒體復(fù)合物III蛋白表達ELISA定量檢測試盒
L-3-苯乳酸 細胞線粒體復(fù)合物IV蛋白表達流式細胞儀檢測試盒鹽酸巴馬汀;黃藤素;棕櫚堿Palmatine hydrochloride10605-02-420mgHPLC≥98%
鹽酸白屈菜紅堿;白菜屈紅堿化物; 白屈菜赤堿化物ChelerythrineChloride3895-92-920mgHPLC≥98%
鹽酸川芎嗪;2,3,5,6-四基吡嗪鹽酸鹽Ligustrazine Hydrochloride97747-88-120mgHPLC≥98%
鹽酸黃柏堿;黃柏堿鹽酸鹽Phellodendrine chloride104112-82-520mgHPLC≥98%
鹽酸黃連堿;黃連堿鹽酸鹽Coptisine chloride6020-18-420mgHPLC≥98%
鹽酸青藤堿Sinomenine Hydrochloride6080-33-720mgHPLC≥98%
鹽酸石蒜堿;石蒜堿鹽酸鹽Lycorine chloride2188-68-320mgHPLC≥98%
鹽酸水蘇堿;水蘇堿鹽酸鹽Stachydrine hydrochloride4136-37-220mgHPLC≥98%
鹽酸甜菜堿;鹽酸甜菜堿;甜菜堿鹽酸鹽;三銨內(nèi)酯鹽酸鹽;甘氨酸三胺內(nèi)鹽鹽酸鹽;三銨內(nèi)酯鹽酸鹽Betaine hydrochloride590-46-520mgHPLC≥98%
鹽酸吐根Emetine Hydrochloride14198-59-520mgHPLC≥98%