浙江福立分析儀器有限公司
超實用干貨（一) | 如何選擇合適的C18色譜柱？
檢測樣品：肉蓯蓉
檢測項目：含量測定
方案概述：十八烷基硅烷（常被稱為ODS或C18）是最早的鍵合固定相之一，C18是具有烷基鏈的硅烷化劑與硅膠表面的硅醇基反應制得的鍵合相。因為使用了共價鍵和的方式將烷基鏈緊緊固定在硅膠表面，所以烷基鏈不會被流動相沖洗掉，作為色譜固定相穩(wěn)定發(fā)揮作用。
《中國藥典》中涉及使用液相色譜法進行檢測的品種，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱應用最為廣泛。
十八烷基硅烷（常被稱為ODS 或C18）是最早的鍵合固定相之一，C18是具有烷基鏈的硅烷化劑與硅膠表面的硅醇基反應制得的鍵合相。因為使用了共價鍵和的方式將烷基鏈緊緊固定在硅膠表面，所以烷基鏈不會被流動相沖洗掉，作為色譜固定相穩(wěn)定發(fā)揮作用。
然而多數情況《中國藥典》僅指明色譜柱的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，卻沒有明確的規(guī)格信息。C18色譜柱因鍵合方式、粒徑、長度、內徑等諸多因素呈現出不同選擇性。目前市場上的C18色譜柱種類眾多，而《中國藥典》又缺少選柱詳細指導，使得色譜分析工作者執(zhí)行藥典推薦方法選擇合適色譜柱的時候，會感到非常困惑。
本文將以2020版《中國藥典》中肉蓯蓉的含量測定為例，從色譜柱的碳載量、柱長和填料基質三個維度闡述如何選擇一支合適的液相色譜柱。
如圖所示，2020版《中國藥典》中肉蓯蓉的含量測定中，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，僅有色譜柱填料類型，無具體規(guī)格。我們選擇了4種C18色譜柱（見表）對肉蓯蓉的對照品分別進行了分析測試。
①藥典里注明“以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑”且沒有特別指明規(guī)格明細的情況下，色譜柱的規(guī)格我們一般就選HPLC上常用的規(guī)格：柱長250 mm，內徑4.6 mm，粒徑5 μm。流動相pH在色譜柱pH使用范圍內的前提下，選在中藥飲片分析中通用性強的全多孔型色譜柱1，碳載量為15%。
實驗結果：在藥典的流動相梯度下，肉蓯蓉的對照品溶液中毛蕊花糖苷未被洗脫下來，需要延長流動相的梯度毛蕊花糖苷才能出峰。雖然松果菊苷的塔板數達到了藥典的要求，但分析效率偏低。
②優(yōu)化柱長。一般來說柱越短，分離所需時間越短。選用全多孔型色譜柱2，碳載量為15%，柱長150 mm，內徑4.6 mm，粒徑5 μm。
實驗結果：在藥典的流動相梯度下，肉蓯蓉的對照品溶液中中毛蕊花糖苷未被洗脫下來，需要延長流動相的梯度毛蕊花糖苷才能出峰。并且松果菊苷的塔板數也只是勉強滿足藥典的要求。這就意味著色譜柱的壽命也不會很長。對于分析工作者來說，這不是一個高性價比的選擇。
③優(yōu)化碳載量。一般來說，碳載量越小，色譜柱的疏水作用能力越弱，對物質的保留越弱。選用全多孔型色譜柱3，碳載量為15%，柱長250 mm，內徑4.6 mm，粒徑5 μm。
實驗結果：和色譜柱1同樣的色譜條件下，雖然保留時間均有所提前，松果菊苷的塔板數也達到了藥典的要求，但總分析時間也已經接近60分鐘了，分析效率仍然較低。
④優(yōu)化硅膠顆粒類型，選用核殼型填料色譜柱4。
全多孔型填料色譜柱更為常見，鍵合相種類更多；
核殼型填料色譜柱相對于全多孔型色譜柱而言，具有高柱效、快速分析的優(yōu)勢。
實驗結果：肉蓯蓉中的松果菊苷和毛蕊花糖苷的檢測，整體分析時間在40分鐘以內，優(yōu)化了分析效率，同時理論塔板數也滿足藥典要求。
不同C18色譜柱之間的保留行為差別很大，選擇合適的C18色譜柱是藥物分析工作的重點。目前使用《中國藥典》未能對各品種項下的C18色譜柱進行品牌和規(guī)格方面的規(guī)定。所以在藥物分析工作中，要注意到C18色譜柱之間的差異，并挑選合適的C18色譜柱來開展實驗分析。
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