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實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法2020/07/28: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法有實(shí)時(shí)熒光PCR一步法與實(shí)時(shí)熒光PCR兩步法。一步法與兩步法有什么區(qū)別呢？一步法為反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增在同一個(gè)管內(nèi)完成。兩步法為反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增分兩步進(jìn)行，先從RAN模板反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，得到的cDNA在進(jìn)行一次或多次不同的PCR反應(yīng)。一步法與兩步法有那些優(yōu)點(diǎn)呢？一步法:快速,簡(jiǎn)便,敏感,減少污染機(jī)會(huì),減少了RNA二級(jí)結(jié)構(gòu),聚合

熒光PCR凍干-DTT2020/07/27: 二硫蘇糖醇（簡(jiǎn)稱(chēng)為DTT）是一種小分子有機(jī)還原劑，其還原狀態(tài)下為線(xiàn)性分子。DTT有什么特點(diǎn)？怎么保存呢？DTT是一種常用還原劑，有抗氧化作用，進(jìn)口分裝。DTT和巰基乙醇相比，DTT的刺激性氣味要小很多，毒性也比巰基乙醇低很多。另外DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時(shí)，兩者效果相近。DTT一般保存條件為-20℃保存。1MDTT溶液可以在-20℃保存2年以上。由于容易被空氣氧化，DTT的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長(zhǎng)它的使用壽命。DTT作為PCR的添加劑與DMSO、甜菜堿、BSA混合配制

熒光PCR凍干保護(hù)劑-牛血清白蛋白2020/07/26: 牛血清白蛋白是牛血清中的一種球蛋白。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用。牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后起到“保護(hù)”或“載體”作用，不少酶類(lèi)添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。在37℃，酶切反應(yīng)超過(guò)1h時(shí)，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定。牛血清白蛋白可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限制性?xún)?nèi)切酶活性的金屬離子和其它化學(xué)物質(zhì)。牛血清白蛋白在熒光PCR凍干時(shí)常作為凍干保護(hù)劑使用，其中與甘油、海藻糖、DTT、

熒光PCR凍干-吐溫2020/07/25: 吐溫溶于水，容易分散。按結(jié)構(gòu)式中R不同，分為吐溫20、吐溫40、吐溫80和吐溫85等種類(lèi)。由司班分子中殘余的羥基與氧化乙烯縮合而成。主要用作乳化劑，色層分析固定液。吐溫的應(yīng)用例如吐溫80在水、乙醇、甲醇或醋酸乙酯中易溶，在礦物油中極微溶解。應(yīng)用于注射液及口服液的增溶劑或乳化劑；膠囊劑用分散劑；軟膏劑用乳化劑和基質(zhì)，栓劑用基質(zhì)等。例如吐溫20在實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)緩沖液的應(yīng)用，反應(yīng)緩沖液包括這些原料如三羥甲基氨基甲烷?鹽酸緩沖液、氯化鎂、硫酸銨、二甲基亞砜、脫氧核糖核苷三磷酸、甘油、牛血清蛋白、吐溫

熒光PCR凍干保護(hù)劑-PEG2020/07/24: 聚乙二醇（PEG）是親水性高分子物質(zhì)，可作為增塑劑以改變聚合物的物理機(jī)械性質(zhì)，使其更具柔順性、塑性。聚乙二醇可作為增塑劑、潛溶劑、注射用溶劑、半極性溶劑、抗粘劑、潤(rùn)濕劑。聚乙二醇在化妝品工業(yè)和制藥工業(yè)中的應(yīng)用很廣泛。聚乙二醇有哪些作用呢？1、由于聚乙二醇具有水溶性、不揮發(fā)性、生理惰性、溫和性等可選取不同相對(duì)分子質(zhì)量級(jí)分的聚乙二醇改變制品的粘度、吸濕性和組織結(jié)構(gòu)。2、在清洗劑中，聚乙二醇也用作懸浮劑和增稠劑。3、聚乙二醇廣泛用于多種藥物制劑，如注射劑、局部用制劑、眼用制劑、口服和直腸用制劑。4、聚

熒光PCR凍干保護(hù)劑-甘油2020/07/23: 甘油又叫丙三醇，為無(wú)色透明的粘稠狀液體，吸水性強(qiáng)，能從空氣中吸取水分，可以任意比例與水乙醇相混合，不溶于笨、四氯化碳和二氧化碳等有機(jī)溶劑，不溶于油脂。甘油在醫(yī)藥領(lǐng)域主要用于抗菌防腐劑、柔和劑、保濕劑、增塑劑、溶劑、甜味劑等。在制劑生產(chǎn)中使用甘油需注意因甘油為高熱可燃性有機(jī)物，與強(qiáng)氧化劑混合可能發(fā)生劇烈的反應(yīng)甚至爆炸。另外在使用甘油生產(chǎn)制劑時(shí)，一定要確保沒(méi)有鐵污染物摻雜在其中，否則會(huì)導(dǎo)致甘油與苯酚、水楊酸、丹尼酸的混合物顏色變黑，從而影響藥品的質(zhì)量。熒光PCR凍干反應(yīng)液中甘油的濃度為高濃度時(shí)會(huì)有起

實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)使用時(shí)需注意點(diǎn)2020/07/22: 實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)在使用時(shí)需要注意點(diǎn)。1.臺(tái)式凍干機(jī)要將主機(jī)放置于桌面上，真空泵放置于地面上。如果出現(xiàn)突然停電時(shí)，二者的高度差能阻止真空泵返油。2.凍干機(jī)主機(jī)一般采用風(fēng)冷式全封閉制冷系統(tǒng)，制冷劑為新型無(wú)氟制冷劑，環(huán)境溫度不要超過(guò)30℃，否則會(huì)影響制冷機(jī)正常工作。3.主機(jī)安裝時(shí)左側(cè)、右側(cè)、后面與墻壁的距離應(yīng)在20公分以上，保證正常通風(fēng)散熱。4.降低真空泵噪音，減輕震動(dòng)，可以在真空泵下面墊一些軟性泡沫板、紙板等。5.操作過(guò)程中不要頻繁開(kāi)關(guān)，如果因?yàn)殄e(cuò)誤操作造成制冷機(jī)停止運(yùn)轉(zhuǎn)，不要馬上啟動(dòng)，等待二十分鐘后在

體外診斷試劑之生物芯片2020/07/21: 生物芯片主要包括DNA芯片、蛋白芯片、組織芯片和細(xì)胞芯片等。生物芯片診斷試劑產(chǎn)品基本可分成二個(gè)部分，一部分是芯片，另一部分檢測(cè)用工作液。生物芯片工作液配制包括：1．芯片生產(chǎn)所需試劑，包括細(xì)胞培養(yǎng)基，探針制備試劑，陣列制作和固定試劑等。2．樣品處理試劑，芯片檢測(cè)靶分子分為核酸和蛋白質(zhì)。檢測(cè)核酸的樣品處理試劑包括臨床取樣，DNA提取或RNA提取試劑，逆轉(zhuǎn)錄試劑，PCR擴(kuò)增試劑，核酸標(biāo)記試劑等；檢測(cè)蛋白的處理試劑包括取樣試劑，蛋白稀釋液以及特殊試劑等。3．反應(yīng)液：檢測(cè)核酸時(shí)的反應(yīng)液包括預(yù)雜交液，雜交液

熒光PCR凍干試劑形式及要點(diǎn)2020/07/19: 熒光PCR凍干試劑研發(fā)要點(diǎn)：1.倉(cāng)儲(chǔ)溫度設(shè)計(jì)。2.凍干保護(hù)劑篩選。3.容器設(shè)計(jì)。4.生產(chǎn)環(huán)境設(shè)計(jì)、設(shè)備設(shè)計(jì)。熒光PCR凍干試劑形式有西林瓶?jī)龈?，八連管凍干，凍干微芯等。下面簡(jiǎn)單的介紹一下凍干微芯的優(yōu)點(diǎn)。能準(zhǔn)確定量，單人單份，產(chǎn)品使用方便，可實(shí)現(xiàn)特殊工藝處理，防止吸潮，對(duì)包材沒(méi)有要求，可以分裝到八連管、微流控芯片、各種生物芯片、卡、流式管、96孔板等包材里，而且可以實(shí)現(xiàn)常溫儲(chǔ)存。熒光PCR凍干試劑的凍干機(jī)技術(shù)要點(diǎn)：1.完整的PAT控制技術(shù)，可對(duì)凍干過(guò)程進(jìn)行完整的控制和分析監(jiān)控。包括預(yù)凍全過(guò)程控制、

實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品稀釋法2020/07/19: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料，利用熒光信號(hào)積累對(duì)PCR反應(yīng)的過(guò)程，進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控實(shí)現(xiàn)起始模板的準(zhǔn)確定量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋方法依次是選擇目標(biāo)、提取/PCR、純化、測(cè)試濃度、調(diào)整濃度、梯度稀釋。一般CT值在18-30之間，覆蓋全部樣品濃度區(qū)間。和大家在分享一下10倍連續(xù)梯度稀釋方法：1V原液（標(biāo)準(zhǔn)品為i）+9V稀釋緩沖液，得到標(biāo)準(zhǔn)品為ii。1V標(biāo)準(zhǔn)品ii+9V稀釋緩沖液，得到標(biāo)準(zhǔn)品為iii,1V標(biāo)準(zhǔn)品iii+9V稀釋緩沖液，得到標(biāo)準(zhǔn)品為iv,1

熒光PCR之常用探針2020/07/18: 熒光PCR技術(shù)擁有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，已成為了分子生物學(xué)研究的重要工具。常用的探針有全基因組核酸探針、克隆探針、寡核苷酸探針、單鏈RNA探針、cDNA探針、蛋白質(zhì)探針以及酶探針。常用的幾種探針都有各自的優(yōu)點(diǎn)。例如酶探針中，分子信標(biāo)核酶探針常用，優(yōu)點(diǎn)是設(shè)計(jì)及操作簡(jiǎn)單，能準(zhǔn)確靈敏地反應(yīng)核酶切割反應(yīng)過(guò)程，為核酶篩選及切割動(dòng)力學(xué)研究提供直接依據(jù)。例如RNA探針一般都是單鏈，具有許多DNA單鏈探針?biāo)鶝](méi)有的優(yōu)點(diǎn)，主要是：RNA：DNA雜交體比DNA：DNA雜交體

實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)的注意事項(xiàng)2020/07/17: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)需要先制備混合反應(yīng)液，大劑量包裝的反應(yīng)試劑，使用前進(jìn)行分裝，盡量減少試劑的反復(fù)凍融。建議所有樣本要有三個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程時(shí)需注意以下幾點(diǎn)，有利于避免實(shí)驗(yàn)污染問(wèn)題。1.用稀釋的漂白劑或凈化劑擦拭凈化臺(tái)。2.在的配有紫外燈超凈式或者超靜臺(tái)中準(zhǔn)備樣品，理想的是樣品的準(zhǔn)備與PCR的擴(kuò)增分開(kāi)在不同的區(qū)域完成。3.在樣品制備和配制反應(yīng)過(guò)程中要勤換手頭。4.勤用稀釋的漂白劑擦拭移液器。5.只使用PCR級(jí)的水和PCR試劑進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)。5.用帶旋蓋的EP管稀釋和配制反應(yīng)液。6.在進(jìn)行PC

熒光PCR實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟2020/07/16: 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)所需的耗材有八連管，光學(xué)級(jí)八連管蓋子，光學(xué)級(jí)96孔板封膜，96孔板等。熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程分為RAN的提取，反轉(zhuǎn)錄,熒光定量PCR反應(yīng),數(shù)據(jù)分析。做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)有幾個(gè)關(guān)鍵步驟需要注意1.應(yīng)有合適數(shù)目的生物學(xué)重復(fù)及正確的對(duì)照樣品設(shè)置2.樣品的獲得應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)流程中對(duì)采樣，處理和保存的要求及確保重復(fù)性并減小重復(fù)樣品間的標(biāo)準(zhǔn)偏差。3對(duì)RAN的純度和完整性進(jìn)行質(zhì)量控制。4.將總RAN反轉(zhuǎn)錄成cDNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。5.試驗(yàn)中正確的引物設(shè)計(jì)，引物退火溫度確定，基因擴(kuò)增效率摸索。6.

多重?zé)晒釶CR2020/07/14: 多重?zé)晒釶CR也叫多重引物熒光PCR，主要用于多種病院微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定某些病原微生物、某些遺傳病。其優(yōu)點(diǎn)是解決不同類(lèi)型的核酸，需要多次擴(kuò)增的情況，不僅節(jié)省了時(shí)間，還節(jié)約了耗材成本。并且多重?zé)晒釶CR試劑凍干后，方便運(yùn)輸，穩(wěn)定性好。多重?zé)晒釶CR的原理是在同一PCR反應(yīng)體系里加上兩對(duì)以上的引物、探針，從而對(duì)兩種或兩種以上的不同核酸片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增。目前，基于熒光探針的多重?zé)晒釶CR試劑基本都是對(duì)同一種類(lèi)型的核酸進(jìn)行檢測(cè)，如都針對(duì)DNA類(lèi)的核酸或都針對(duì)RNA類(lèi)的核酸。在做多重?zé)晒釶CR試劑凍

熒光定量PCR凍干保護(hù)劑的篩選及優(yōu)化2020/07/13: 在做熒光定量PCR凍干時(shí)，先要對(duì)凍干保護(hù)劑進(jìn)行篩選，可采用的凍干保護(hù)劑（大加注量）包含：5wt.%的甘油、100mg/mL的海藻糖、5mmol/L的DTT、1wt.%牛血清白蛋白、0.3wt.%Proclin300、1wt.%甲酰胺等。篩選完凍干保護(hù)劑后需要進(jìn)行優(yōu)化，舉個(gè)例子講一下凍干保護(hù)劑的優(yōu)化。先將各種凍干保護(hù)劑稀釋成多組不同的濃度，與配置好的反應(yīng)試劑混勻，然后進(jìn)行無(wú)菌分裝，200ul的8連管中，每管加入20ul。凍干后根據(jù)凍干樣品的性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)。Pilot7-12T凍干機(jī)應(yīng)用于醫(yī)療，涉及產(chǎn)

PCR試劑凍干過(guò)程2020/07/12: PCR技術(shù)是一種在體外模擬DNA復(fù)制過(guò)程的核酸過(guò)程技術(shù)。PCR技術(shù)應(yīng)用于不對(duì)稱(chēng)PCR制備單鏈DNA,反向PCR測(cè)定未知DNA區(qū)域，反轉(zhuǎn)錄PCR，cDNA末端快增技術(shù)等，PCR試劑包括：1.各種提取dna的常用試劑和純化dna所用的試劑。2.PCRtaq酶,dntp（四種堿基）,緩沖試劑（buffer）,引物。3.瓊脂糖,聚丙烯酰胺凝膠,aps,tmed,eb等。在做其中一類(lèi)PCR試劑凍干時(shí)，先將裝有PCR試劑的西林瓶放入凍干機(jī)倉(cāng)內(nèi)，預(yù)凍要大約經(jīng)過(guò)40-60分鐘，隔板溫度大約降到-50℃左右，預(yù)凍

實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)操作法之開(kāi)機(jī)操作2020/07/06: 實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)操作簡(jiǎn)單易懂，即使是沒(méi)有使用過(guò)凍干機(jī)也能很快掌握操作法。下面簡(jiǎn)單介紹下實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)FD-2C開(kāi)機(jī)操作法。開(kāi)機(jī)操作時(shí)，先要連接好總電源線(xiàn)，打開(kāi)后側(cè)的總電源開(kāi)關(guān)，這時(shí)顯示窗開(kāi)始顯示冷阱溫度。在按一下制冷機(jī)開(kāi)關(guān)，制冷機(jī)開(kāi)始運(yùn)轉(zhuǎn)，此儀器為雙極制冷，需要注意的是大約20分鐘后第二極制冷開(kāi)始運(yùn)轉(zhuǎn)。為使冷阱具有充分吸附水的能力，在第二極制冷運(yùn)轉(zhuǎn)后，預(yù)冷時(shí)間要不少于30分鐘。在按一下真空計(jì)開(kāi)關(guān)，真空度顯示為999。預(yù)冷結(jié)束后，將準(zhǔn)備好的制品置于物料盤(pán)中，在將有機(jī)玻璃筒罩上。這時(shí)按下快速充氣閥上的按片

凍干制品的關(guān)鍵屬性2020/07/02: 凍干制品的關(guān)鍵屬性影響著整個(gè)凍干過(guò)程。凍干質(zhì)量參數(shù)是否能達(dá)成，是由關(guān)鍵屬性決定的。凍干制品關(guān)鍵屬性：物理性質(zhì)包括粒徑、形態(tài)、粒徑分布、不同PH值下的溶解度、含水率值、外觀(guān)要求、吸濕性、共熔點(diǎn)、共晶點(diǎn)、玻璃態(tài)轉(zhuǎn)換溫區(qū)、塌陷溫區(qū)、倉(cāng)儲(chǔ)玻璃態(tài)轉(zhuǎn)換溫區(qū)、晶型等?；瘜W(xué)性質(zhì)包括酸堿解離常數(shù)、對(duì)酸堿光照氧濕熱等的穩(wěn)定性。生物性質(zhì)包括不同PH值對(duì)活性影響、不同升降溫速率對(duì)活性影響、倉(cāng)儲(chǔ)溫度對(duì)活性影響、油水分配系數(shù)、膜通透性、生物利用度及常用輔料活性保持值。凍干研發(fā)項(xiàng)目涉及面廣且復(fù)雜，博醫(yī)康凍干技術(shù)將從應(yīng)用開(kāi)發(fā)技

實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)之鐘罩凍干機(jī)2020/06/29: 實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)之鐘罩凍干機(jī)，一般在大學(xué)實(shí)驗(yàn)室，科研研究所等使用較多。其優(yōu)點(diǎn)是體積較小，預(yù)算成本低，性能穩(wěn)定，可滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求。適合凍干水溶性溶液、懸濁液或糊狀物質(zhì)，共晶點(diǎn)溫度高于-20℃。根據(jù)不同類(lèi)型的凍干制品選擇適用的鐘罩凍干機(jī)。如選用不銹鋼盤(pán)可凍干散裝物料，與帶壓蓋的有機(jī)玻璃干燥室組合可凍干西林瓶，與帶掛瓶的有機(jī)玻璃干燥時(shí)組合可凍干在燒瓶?jī)?nèi)的樣品，與T型架附件組合可凍干安瓿瓶。鐘罩凍干機(jī)FD-1A-50特點(diǎn)：臺(tái)式設(shè)計(jì)，緊湊，占用臺(tái)面小。外形美觀(guān)，人體工學(xué)設(shè)計(jì)，操作方便。品牌全封閉壓縮機(jī)，高效可靠

實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)真空度排除法2020/06/22: 實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)真空度達(dá)不到指標(biāo)的故障排除法：1檢查放氣閥是否關(guān)緊，可在抽氣過(guò)程中反復(fù)開(kāi)、關(guān)該閥，讓外界空氣吹沖閥孔，吹除閥內(nèi)可能有的雜質(zhì)，從而保證閥的密封。2真空泵與主機(jī)之間由真空管連接，檢查連接處的卡箍是否擰緊，右側(cè)抽氣口的不銹鋼接頭，要順時(shí)針?lè)较驍Q緊。3檢查玻璃罩底面是否光潔平整，橡膠密封圈是否破損，在真空泵開(kāi)始工作的時(shí)候，用力下壓玻璃罩一會(huì)，有利于密封。4檢查真空泵油質(zhì)量，從視油鏡觀(guān)察泵油是否渾濁或混入雜質(zhì)，一般情況下連續(xù)工作200小時(shí)，就需要更換真空泵油。實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)FD-1A-80特點(diǎn)：

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