以下是植物醇溶谷蛋白(ASP)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明書，綜合整理自相關(guān)技術(shù)資料：

　　BS-4955  植物醇溶谷蛋白(ASP)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。預(yù)先包被ASP捕獲抗體的微孔板中依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體，經(jīng)溫育洗滌后，通過TMB顯色反應(yīng)(藍(lán)色→黃色)實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)，顏色深淺與ASP濃度呈正相關(guān)?。

　　二、樣本處理要求

　　血清?

　　采集后室溫靜置2小時(shí)或4℃過夜，1000×g離心20分鐘取上清

　　避免反復(fù)凍融，建議-20℃/-80℃保存?

　　血漿?

　　需使用EDTA/肝素抗凝劑，采集后30分鐘內(nèi)2-8℃ 1000×g離心15分鐘?

　　組織勻漿?

　　建議使用預(yù)冷PBS(pH7.4)制備勻漿液?

　　三、操作步驟

　　將試劑平衡至室溫(約30分鐘)?

　　分別加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本至對(duì)應(yīng)微孔(建議做復(fù)孔)?

　　加入HRP標(biāo)記抗體，37℃溫育60分鐘?

　　洗板5次(每次靜置30秒棄液)?

　　每孔加入TMB顯色液，避光反應(yīng)15分鐘?

　　加入終止液，15分鐘內(nèi)450nm波長(zhǎng)測(cè)OD值?

　　四、注意事項(xiàng)

　　保存條件?：試劑盒需2-8℃避光保存，有效期6個(gè)月?

　　安全規(guī)范?：

　　禁止用嘴吸取試劑?

　　避免接觸終止液/TMB，若接觸立即沖洗?

　　質(zhì)量控制?：

　　板內(nèi)變異系數(shù)<10%，板間<15%?

　　空白OD值應(yīng)≤0.08?

　　五、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過曲線方程計(jì)算樣本濃度?。檢測(cè)范圍通常為0.25-8ppm?。

　　(注：具體操作請(qǐng)以試劑盒內(nèi)附說明書為準(zhǔn)，本說明綜合了不同廠家的通用流程?)

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