用于提取酵母細胞中的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料的*新型材料,專一吸附DNA,可zui大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。若酵母蛋白抽提試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,可在65度水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。如果實驗中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況,可適當(dāng)延長離心時間。酵母蛋白抽提試劑盒利用了氯化芐的這一特性,將植物樣品凍結(jié)融解后,再使用將植物樣品在壁上數(shù)次按壓即可破壞細胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比,省去了液氮研磨等煩瑣步驟,有利于一次性處理大量樣品。
酵母蛋白抽提試劑盒經(jīng)過了改良,熱處理時間只需15分鐘,使用其從實驗開始至水相回收只需30分鐘時間。得到的基因組DNA可以進行PCR擴增及限制酶處理等。依次加入生物素化的抗人CRP抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗人CRP抗體與結(jié)合在包被抗體上的人CRP結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入發(fā)光底物混合液,發(fā)光底物在辣根過氧化物酶的催化下發(fā)出熒光,用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測定化學(xué)發(fā)光值,CRP濃度與化學(xué)發(fā)光值之間呈正相關(guān),通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CRP的濃度。
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