TNF試劑盒的檢測(cè)原理及使用注意

　　檢測(cè)原理: TNF試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)樣本中TNF-α的濃度。TNF-α捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)本或參考品時(shí)，其中的TNF-α會(huì)與捕獲抗體結(jié)合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當(dāng)加入生物素化的抗人TNF-α抗體后，抗人TNF-α抗體與TNF-α接合，形成夾心的免疫復(fù)合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親合素。生物素與親合素特異性結(jié)合，親合素連接的酶就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。zui后加入顯色劑，若樣本中存在TNF-α將會(huì)形成免疫復(fù)合物，辣根過氧化物酶會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)，讀其450nm處的OD值，TNF-α濃度與OD450值之間呈正比，通過參考品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照未知樣本中OD值，即可算出標(biāo)本中TNF-α濃度。

　　注意事項(xiàng):

　　1.TNF試劑盒請(qǐng)保存在2～8℃。

　　2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結(jié)晶，請(qǐng)水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液。

　　3.若標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后，請(qǐng)?jiān)谌靸?nèi)用完。

　　4.底物請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬。

　　5.加樣時(shí)，請(qǐng)及時(shí)更換槍頭，避免交叉污染。

　　6.嚴(yán)禁混用不同批號(hào)的試劑盒組份。

　　7.充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

　　8.室溫反應(yīng)，請(qǐng)嚴(yán)格控制在25～28℃。

　　9.洗滌過程是至關(guān)重要的，洗滌不充分會(huì)使度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。

　　10.試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測(cè)時(shí)建議作雙復(fù)孔。

　　11.加樣過程中避免氣泡的產(chǎn)生。

　　12.血清和血漿標(biāo)本的檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)抗體的孵育時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)。TNF試劑盒的檢測(cè)原理及使用注意

　　檢測(cè)原理: TNF試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)樣本中TNF-α的濃度。TNF-α捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)本或參考品時(shí)，其中的TNF-α會(huì)與捕獲抗體結(jié)合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當(dāng)加入生物素化的抗人TNF-α抗體后，抗人TNF-α抗體與TNF-α接合，形成夾心的免疫復(fù)合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親合素。生物素與親合素特異性結(jié)合，親合素連接的酶就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。zui后加入顯色劑，若樣本中存在TNF-α將會(huì)形成免疫復(fù)合物，辣根過氧化物酶會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)，讀其450nm處的OD值，TNF-α濃度與OD450值之間呈正比，通過參考品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照未知樣本中OD值，即可算出標(biāo)本中TNF-α濃度。

　　注意事項(xiàng):

　　1.TNF試劑盒請(qǐng)保存在2～8℃。

　　2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結(jié)晶，請(qǐng)水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液。

　　3.若標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后，請(qǐng)?jiān)谌靸?nèi)用完。

　　4.底物請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬。

　　5.加樣時(shí)，請(qǐng)及時(shí)更換槍頭，避免交叉污染。

　　6.嚴(yán)禁混用不同批號(hào)的試劑盒組份。

　　7.充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

　　8.室溫反應(yīng)，請(qǐng)嚴(yán)格控制在25～28℃。

　　9.洗滌過程是至關(guān)重要的，洗滌不充分會(huì)使度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。

　　10.試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測(cè)時(shí)建議作雙復(fù)孔。

　　11.加樣過程中避免氣泡的產(chǎn)生。

　　12.血清和血漿標(biāo)本的檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)抗體的孵育時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)。