簡(jiǎn)介：

PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)主要由 PEG1450(CAS號(hào)25322-68-3)、磷酸鹽等組成，其作用原理使能夠改變各類(lèi)細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類(lèi)分子發(fā)生疏散和重組，兩細(xì)胞接口處在雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用下，細(xì)胞發(fā)生融合。PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)可用作融合劑，以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞雜交，該試劑同Sigma P7181產(chǎn)品，經(jīng)嚴(yán)格無(wú)菌處理。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、MEM 培養(yǎng)基、胎牛血清

2、CO2 培養(yǎng)箱、離心機(jī)

3、HAT、HT、A Media Supplement

4、胰蛋白酶消化液

操作步驟(僅供參考)：
1、如果變成膠凍狀，可 37~60℃水浴使其變成溶液。 

2、單層貼壁細(xì)胞：將雜交前體細(xì)胞以相同數(shù)量(5×104/ml)接種，以適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，待細(xì)胞貼壁擴(kuò)展至匯合成片(80%匯合率)的密度，吸干培養(yǎng)液，加入2ml PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)1min 使PEG1450溶液覆蓋所有細(xì)胞，靜置1min，加入5mlMEM培養(yǎng)液以稀釋 PEG1450溶液，吸干凈稀釋的 PEG1450溶液，再用 5ml MEM 培養(yǎng)液洗滌被 PEG 處理的細(xì)胞，吸干凈洗液，加入5ml MEM 培養(yǎng)液，37℃，5%CO2 培養(yǎng)過(guò)夜；24~48h后先吸去培養(yǎng)液，加入胰酶消化液處理細(xì)胞，待細(xì)胞消化后吸除胰酶消化液，用 HAT 選擇培養(yǎng)剔除 HPRT和TK缺陷細(xì)胞；棄上清液，用補(bǔ)加1×HT 和 1×A的培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，融合12~24h 后進(jìn)行異核體分析，雜交前體細(xì)胞在4~5天內(nèi)發(fā)生死亡，對(duì)于大多數(shù)融合前體細(xì)胞而言，10~14天可見(jiàn)雜交細(xì)胞克隆。
3、懸浮細(xì)胞：將兩種不同親體的細(xì)胞各1ml(約為 1×107)混勻，800g 離心10min 以沉淀雜交前體細(xì)胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細(xì)胞混勻并重新懸浮，在離心管中加入1ml PEG1450 溶液(50%,無(wú)菌)，置于37℃水浴 2min，加入5ml提前 37℃預(yù)熱的含10%胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)液，使 PEG1450稀釋并停止作用，1000g 離心 5min，棄上清液，加入5mlMEM 培養(yǎng)液以稀釋 PEG1450溶液，吸干凈稀釋的 PEG1450 溶液。用 5ml無(wú)血清 MEM 培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細(xì)胞(不要破壞細(xì)胞)，1000g離心5min， 棄上清液，重復(fù) 1 次該步驟，加入含有20%的胎牛血清的 HAT 選擇培養(yǎng)基，混勻，將細(xì)胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×104/ml，接種于96孔板（每孔 0.1ml）或其他器皿中，37℃ 5%CO2 孵育過(guò)夜24~48h 后選出融合細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：

1、應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免被微生物污染。

2、PEG1450溶液較為粘稠時(shí)，可37~60℃水浴使其變成溶液。

3、體外培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細(xì)胞。

 有效期：6 個(gè)月有效。