在細胞生物學(xué)研究中，對活細胞進行熒光標記和示蹤是觀察細胞行為、分析細胞增殖和研究細胞功能的重要手段。5(6)-CFDA, SE作為一種高效的細胞示蹤染料，憑借其性能和廣泛的應(yīng)用，成為細胞標記領(lǐng)域的理想選擇。

一、5(6)-CFDA, SE 的熒光標記原理與特性

5(6)-CFDA, SE 是一種用于活細胞熒光標記的細胞示蹤染料。其核心成分 CFDA（羧基熒光素二乙酸酯）在細胞內(nèi)被酯酶剪切后，轉(zhuǎn)化為具有強熒光的羧基熒光素（CF）。這種熒光物質(zhì)能夠穩(wěn)定地滯留在細胞內(nèi)，發(fā)出明亮的綠色熒光，熒光強度與細胞內(nèi)的酯酶活性相關(guān)，可反映細胞的代謝狀態(tài)和活性水平。5(6)-CFDA, SE 的熒光標記具有以下特點：

• 低細胞毒性：5(6)-CFDA, SE 對細胞的毒性極低，不會顯著影響細胞的正常生理功能，適用于長期的細胞培養(yǎng)和實驗觀察。

• 良好的細胞膜通透性：該染料能夠快速穿透活細胞的細胞膜進入細胞內(nèi)部，在細胞內(nèi)發(fā)揮作用，實現(xiàn)對活細胞的標記。

• 穩(wěn)定的熒光信號：標記后的細胞熒光信號穩(wěn)定，不易受到光漂白的影響，適合長時間的熒光觀察和檢測。

二、5(6)-CFDA, SE 在細胞增殖與示蹤中的應(yīng)用

細胞增殖研究

5(6)-CFDA, SE 廣泛應(yīng)用于細胞增殖研究。在細胞增殖過程中，標記后的細胞會將熒光物質(zhì)均分到子代細胞中，隨著細胞分裂次數(shù)的增加，熒光強度逐漸減弱。通過熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測細胞的熒光強度，可以定量分析細胞的增殖情況。具體操作如下：

1. 將細胞與 5(6)-CFDA, SE 染色液混合孵育，使染料進入細胞并轉(zhuǎn)化為熒光物質(zhì)。

2. 孵育完成后，用PBS輕輕洗滌細胞，去除未進入細胞的染料。

3. 將標記后的細胞接種到培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板中，進行細胞增殖實驗。

4. 在不同時間點使用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測細胞的熒光強度，分析細胞增殖情況。

細胞示蹤研究

5(6)-CFDA, SE 在細胞示蹤領(lǐng)域也有重要應(yīng)用。在體內(nèi)實驗中，標記后的細胞可以通過熒光信號被追蹤，研究人員能夠?qū)崟r觀察細胞在生物體內(nèi)的分布、遷移和存活情況。例如，在干細胞研究中，5(6)-CFDA, SE 標記的干細胞被移植到宿主體內(nèi)后，可以通過熒光成像技術(shù)觀察干細胞的歸巢、分化和再生能力，為干細胞治療的研究提供重要數(shù)據(jù)支持。標記后的細胞熒光信號在體內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性和可檢測性，能夠滿足長時間、多時間點的示蹤需求。

三、5(6)-CFDA, SE 的操作使用方法

染色前準備

在進行 5(6)-CFDA, SE 染色之前，需要準備好細胞樣本。對于貼壁細胞，可以使用胰蛋白酶消化收集細胞，然后用適當?shù)木彌_液洗滌細胞，去除殘留的培養(yǎng)基成分。對于懸浮細胞，直接收集細胞并進行洗滌。將細胞調(diào)整到合適的濃度，一般為 1×10^5 - 1×10^6 cells/mL，以便于后續(xù)的染色和檢測。

染色過程

將準備好的細胞與 5(6)-CFDA, SE 染色液混合，染料的常用工作濃度為 1 - 10 μM。將混合后的細胞懸液置于 37℃、5% CO? 的細胞培養(yǎng)箱中孵育 15 - 30 分鐘。在孵育過程中，5(6)-CFDA, SE 會穿透細胞膜進入細胞內(nèi)部，被細胞內(nèi)的酯酶剪切轉(zhuǎn)化為熒光物質(zhì)。

染色后處理

孵育完成后，用PBS輕輕洗滌細胞兩次，去除未進入細胞的染料。對于需要進行細胞增殖實驗的樣本，將標記后的細胞接種到培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板中，加入適量的培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。對于需要進行細胞示蹤實驗的樣本，將標記后的細胞用于后續(xù)的體內(nèi)或體外實驗。使用熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測時，設(shè)置 488 nm 的激發(fā)波長和 515 - 530 nm 的發(fā)射波長檢測通道，收集綠色熒光信號，實現(xiàn)對細胞的標記和示蹤。

四、5(6)-CFDA, SE 的應(yīng)用案例與研究成果

5(6)-CFDA, SE 已被廣泛應(yīng)用于多種研究領(lǐng)域。在細胞增殖研究中，科研人員利用 5(6)-CFDA, SE 標記細胞，結(jié)合熒光顯微鏡和流式細胞儀分析，揭示了多種細胞類型在不同生理和病理條件下的增殖特征。在細胞遷移研究中，5(6)-CFDA, SE 標記的細胞被用于觀察細胞在 wound healing 實驗和 transwell 實驗中的遷移能力，為研究細胞運動機制和腫瘤轉(zhuǎn)移提供了重要數(shù)據(jù)支持。

在干細胞研究中，5(6)-CFDA, SE 用于標記和追蹤干細胞在體內(nèi)的分布和分化情況。通過活體成像技術(shù)，研究人員能夠?qū)崟r觀察干細胞的歸巢、分化和再生能力，為干細胞治療的臨床應(yīng)用提供了重要的實驗依據(jù)。此外，5(6)-CFDA, SE 還被用于細胞功能研究，如免疫細胞的活化和功能分析、細胞間相互作用研究等，為細胞生物學(xué)的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用開發(fā)提供了有力工具。