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高保真限制性內(nèi)切酶有什么應(yīng)用?

來(lái)源:柏萊源(天津)生物科技有限公司   2025年04月27日 11:30  
  限制性內(nèi)切酶是一種能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列,并在特*位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶,簡(jiǎn)稱限制酶。高保真限制性內(nèi)切酶是一類經(jīng)過(guò)基因工程改造的分子生物學(xué)工具酶,能夠特異性識(shí)別并切割雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列,同時(shí)在反應(yīng)過(guò)程中保持較低的非特異性切割活性。
  優(yōu)勢(shì):
  高切割效率:基因工程改造提升酶促反應(yīng)速率,單位時(shí)間內(nèi)可處理更多樣本。
  寬反應(yīng)條件范圍:耐受pH、離子強(qiáng)度波動(dòng),兼容不同來(lái)源DNA樣本。
  高保真限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用:
  1、基因工程:用于構(gòu)建基因表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)外源基因的精準(zhǔn)插入;在基因敲除/替換實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)特異性切割目標(biāo)序列完成基因編輯。
  2、分子克?。呵懈頟CR產(chǎn)物與載體DNA,通過(guò)黏性末端互補(bǔ)連接實(shí)現(xiàn)重組DNA分子構(gòu)建,平末端產(chǎn)物則適用于T4 DNA連接酶介導(dǎo)的連接反應(yīng)。
  3、表觀遺傳學(xué)研究:對(duì)DNA甲基化狀態(tài)敏感的酶可用于分析甲基化位點(diǎn)對(duì)基因表達(dá)的影響。
  4、測(cè)序與SNP鑒定:作為測(cè)序預(yù)處理工具,通過(guò)產(chǎn)生可預(yù)測(cè)的酶切片段輔助DNA序列分析;在ddPCR中用于靶向片段富集。

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