在高通量測序技術(shù)日新月異的當(dāng)下，small RNA（涵蓋 miRNA、siRNA、piRNA 等）研究已然成為探索生命調(diào)控奧秘的關(guān)鍵領(lǐng)域。而基于T4 RNA連接酶的建庫技術(shù)，作為small RNA研究的核心環(huán)節(jié)，卻長期受兩大技術(shù)難題困擾：

①連接效率欠佳：傳統(tǒng)T4 RNA連接酶對短鏈RNA適配性不足，極易產(chǎn)生接頭自連等副產(chǎn)物，致使文庫出現(xiàn)嚴(yán)重偏好性；

②末端偏好性顯著：普通酶易受RNA二級結(jié)構(gòu)或末端修飾影響，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差。

圖1.傳統(tǒng)T4 RNA連接酶在small RNA建庫中的應(yīng)用流程示意圖[1]

如今，T4 RNA連接酶2截短型（T4 RNA Ligase 2, truncated，T4 Rnl2tr）的問世，改寫了small RNA建庫技術(shù)格局。該酶能夠特異性催化5′端預(yù)腺苷化的DNA/RNA與RNA 3′-OH末端的連接反應(yīng)。其在于無需ATP參與，不過必須搭配5′端預(yù)腺苷化接頭使用。當(dāng)它與T4 RNA ligase 1協(xié)同運作時，可實現(xiàn)打斷RNA的直接接頭連接，有效遏制接頭串聯(lián)和自連現(xiàn)象，大幅提升測序文庫的構(gòu)建質(zhì)量。

圖2.T4 Rnl2tr聯(lián)合T4 RNA ligase 1在small RNA建庫中的應(yīng)用流程示意圖[2]

在此，我們向您推介翌圣生物全新研發(fā)的T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ（Cat#14653）。這款酶作為T4 Rnl2tr的雙點突變體（R55K, K227Q），在保持高效連接活性的同時，極大程度降低了RNA的非特異性連接問題，諸如 RNA 串聯(lián)或自連成環(huán)等情況，堪稱small RNA 3'端接頭連接和cDNA文庫構(gòu)建的選擇。

目前，翌圣生物已成功構(gòu)建起完備的T4 RNA連接酶產(chǎn)品矩陣，包括T4 RNA ligase 1、T4 RNA ligase 2和T4 RNA ligase 2, truncated KQ，滿足您多樣化的科研需求。其特點及應(yīng)用見下表：

使用翌圣和來自進(jìn)口Supplier A*的T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ分別按照不同投入量加入體系中對31 nt的ssRNA底物（Substrate 1）和17 nt預(yù)腺苷化的ssRNA底物（Substrate 2）進(jìn)行連接實驗。結(jié)果表明，翌圣產(chǎn)品能高效連接 ssRNA 底物，連接效果與進(jìn)口產(chǎn)品不相上下。

圖3.T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ連接效果驗證

參考文獻(xiàn)：

[1] Raabe C A , Thean-Hock T , Juergen B ,et al.Biases in small RNA deep sequencing data[J].Nucleic Acids Research, 2014(3):1414-1426.DOI:10.1093/nar/gkt1021.

[2] Sorefan K , Pais H , Hall A E ,et al.Reducing ligation bias of small RNAs in libraries for next generation sequencing[J].Silence, 2012, 3(1):4-4.DOI:10.1186/1758-907X-3-4.