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制備液相色譜柱通常由柱管、壓帽/卡套、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成，也可采用厚壁玻璃或石英管，內(nèi)壁要求高度光潔以減小管壁效應(yīng)。兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板，防止填料漏出，可分為填充柱和開管柱兩大類，目前液相色譜大多采用填充柱。根據(jù)填料的不同，又可分為硅膠基質(zhì)、氧化鋁基質(zhì)、聚合物基質(zhì)等多種類型。
制備液相色譜柱的填充方法：
1.干法填充：將填料直接裝入柱管內(nèi)，然后通過振動或敲擊使填料分布均勻。這種方法簡單易行，但容易產(chǎn)生氣泡和裂隙，影響柱效。
2.濕法填充：先將填料用適當(dāng)?shù)娜軇腋∑饋恚缓缶徛谷胫軆?nèi)，同時開啟高壓泵使填料在柱內(nèi)分布均勻。濕法填充可以獲得較高的柱效和較好的重復(fù)性，是目前常用的填充方法。
制備液相色譜柱的使用注意事項：
1.流動相的選擇：確保流動相與固定相兼容，避免使用會損壞固定相或?qū)е虏豢赡嫖降娜軇?。有機(jī)溶劑應(yīng)使用色譜純，水應(yīng)為超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。
2.過濾流動相：所有流動相在使用前都應(yīng)通過0.45μm濾膜過濾，以去除可能存在的顆粒物。
3.避免壓力和溫度突變：突然的溫度變化或色譜柱的意外撞擊會影響柱內(nèi)填料的狀態(tài)。在調(diào)節(jié)流速時也應(yīng)緩慢進(jìn)行，以保持色譜柱內(nèi)填料的穩(wěn)定性。
4.逐步改變?nèi)軇┙M成：在需要改變樣品溶液組成時，應(yīng)逐漸進(jìn)行溶劑組成的變化，尤其是在反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)變?yōu)榧兯?，反之亦然?br />
5.防止色譜柱反沖：除非色譜柱的使用說明書明確標(biāo)明可以進(jìn)行反沖來去除柱頭上的雜質(zhì)，否則不應(yīng)進(jìn)行反沖操作。
6.維護(hù)色譜柱清潔：每次使用完畢后，需要充分清洗色譜柱，避免樣品殘留導(dǎo)致柱堵塞和污染。定期對色譜系統(tǒng)進(jìn)行維護(hù)和檢查也是必要的。
總之，遵循正確的操作流程和維護(hù)策略可以提高液相色譜柱的性能和使用壽命。如果在使用過程中遇到任何問題，應(yīng)及時聯(lián)系專業(yè)人員解決。
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