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超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)應(yīng)用脂質(zhì)體多肽疫苗的處方工藝優(yōu)化及免疫效果評價(jià)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
多肽疫苗是按照病原體抗原基因中已知或預(yù)測的某段抗原表位的氨基酸序列，通過化學(xué)合成技術(shù)制備的疫苗。基于脂質(zhì)的遞送系統(tǒng)已被確立為誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)的強(qiáng)大遞送系統(tǒng)，目前應(yīng)用最為廣泛的是脂質(zhì)體和脂質(zhì)納米粒(lipid nanoparticle, LNP)。脂質(zhì)體可以包裹水溶性和脂溶性藥物，增強(qiáng)抗原蛋白的穩(wěn)定性，并通過儲(chǔ)存效應(yīng)促進(jìn)疫苗成分的逐漸釋放，更適合遞送親水性多肽分子，但仍存在穩(wěn)定性較差，包封率較低的問題。本研究選擇脂質(zhì)體作為免疫遞送系統(tǒng)構(gòu)建多肽疫苗，設(shè)計(jì)構(gòu)建了脂質(zhì)體的處方工藝，并通過單因素實(shí)驗(yàn)對脂質(zhì)體制備的處方工藝進(jìn)行優(yōu)化。
二、實(shí)驗(yàn)方法
1.超聲功率的選擇：
以優(yōu)化后的膜材比制備脂質(zhì)體，在保持其他因素不改變的情況下，考慮到超聲功率過大會(huì)導(dǎo)致大量發(fā)熱，依次改變超聲功率(30、40、50、60 W)(儀器：超聲波細(xì)胞粉碎機(jī))，繼續(xù)進(jìn)行4組實(shí)驗(yàn)，分別測定各組脂質(zhì)體粒徑分布和多分散系數(shù)。
2.超聲次數(shù)/時(shí)間的選擇：
以優(yōu)化后的膜材比、超聲功率制備脂質(zhì)體，在控制其他因素不改變的情況下，依次改變超聲次數(shù)(30,40,50,60)，繼續(xù)進(jìn)行4組實(shí)驗(yàn)，分別測定各組脂質(zhì)體粒徑分布和多分散系數(shù)。
超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)展示圖
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.超聲功率的篩選結(jié)果：
由表1可知，當(dāng)超聲功率為30 W、平均粒徑為162.2 nm、PDI為18.3%時(shí)，所制備的脂質(zhì)體最好;當(dāng)超聲功率為60 W時(shí)，功率較大導(dǎo)致溶液溫度明顯升高，脂質(zhì)體的粒徑偏大，PDI為0.351,分散程度也明顯變大，不適合作為制備條件。
2.超聲次數(shù)的篩選結(jié)果：
由表2可知，當(dāng)超聲次數(shù)為40次時(shí)，所得脂質(zhì)體物理性質(zhì)較優(yōu)。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)超聲次數(shù)為60次時(shí)，置于超聲破碎機(jī)內(nèi)的樣品溶液溫度較高，從表2結(jié)果也可以看出，過高的溫度導(dǎo)致所制備的脂質(zhì)體平均粒徑和PDI升高，提示在脂質(zhì)體制備過程中要考慮溫度的影響。
表1 不同超聲功率條件下制備脂質(zhì)體的粒徑分布
表2 不同超聲次數(shù)條件下制備脂質(zhì)體的粒徑分布
四、討論
脂質(zhì)體的理化性質(zhì)是決定脂質(zhì)體發(fā)揮作用效果的重要影響因素，粒徑及其分布是判斷脂質(zhì)體是否合格的重要指標(biāo)。研究表明，納米顆粒(<200 nm)更容易通過淋巴引流進(jìn)入淋巴結(jié)，并促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞的吸收，使其更適合傳遞分子佐劑和抗原。單因素實(shí)驗(yàn)得到的較優(yōu)的制備條件為：膜材比5∶1、超聲功率30 W、超聲次數(shù)40次、高壓均質(zhì)時(shí)間6 min，使脂質(zhì)體的平均粒徑從329.7 nm減小至132.0 nm，對此制備流程進(jìn)行了驗(yàn)證，其結(jié)果與預(yù)期相符，且PDI均在30%以下，說明脂質(zhì)體粒徑分布比較均勻。
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