紅細(xì)胞膜是由磷脂、膽固醇、蛋白質(zhì)等組成的雙層膜結(jié)構(gòu)。在紅細(xì)胞裂解液中,主要包含了陰離子表面活性劑(如十二烷基磺酸鈉)和滲透壓調(diào)節(jié)物(如葡萄糖),這些物質(zhì)可以分解紅細(xì)胞膜,使紅細(xì)胞釋放出血紅蛋白。作用機(jī)制主要有以下幾種:滲透裂解,通過改變細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的滲透壓差,使細(xì)胞溶解;離子置換,與細(xì)胞內(nèi)離子互相置換,從而使細(xì)胞發(fā)生溶解;肌動蛋白降解,針對肌動蛋白進(jìn)行降解,從而實現(xiàn)紅細(xì)胞的裂解。
紅細(xì)胞裂解液的應(yīng)用:
(1)蛋白質(zhì)提取
可用于體積小,難以直接提取的組織和細(xì)胞類型中的蛋白質(zhì)提取。同時水解的SDS還能夠增加樣品的可讀性。
(2)紅細(xì)胞計數(shù)
血液學(xué)領(lǐng)域中,被廣泛應(yīng)用于紅細(xì)胞計數(shù)和血液分類。將血液樣品經(jīng)過裂解后,可使紅細(xì)胞溶解,方便計數(shù)并分析。
(3)其他應(yīng)用
除此之外,還用于單核細(xì)胞分離、細(xì)胞周期分析、人工光合成等方面的研究。
實驗室通常采用十二烷基磺酸鈉(SDS)或三辛基氧化鋁(TOPO)等表面活性劑與葡萄糖混合作為裂解液。將10g/l的SDS加入到20mM/L的Tris-HCl緩沖液中,并在4℃條件下混合過夜;加入可溶性的葡萄糖達(dá)到4%(w/v)的濃度懸濁液制備完成。紅細(xì)胞裂解液應(yīng)存放于4℃冰箱中,避免陽光直射,因為溫度過高可能會分解該液體中的葡萄糖,導(dǎo)致失效。此外,裂解液也需注意避免污染,建議使用濾器或滅菌裝置來凈化。一般情況下,儲存期限不超過12個月。
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