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一、實(shí)驗(yàn)原理

生物膜的研究發(fā)展迅速，要研究生物膜的組成、結(jié)構(gòu)及功能，首先必須分離出純凈的細(xì)胞膜。

分離狀態(tài)下的哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞膜，一般稱為“血影”。哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞中沒有通常真核生物細(xì)胞內(nèi)所含有的任何細(xì)胞器，容易制備得到純粹的細(xì)胞膜，取材方面來源也十分方便，是研究細(xì)胞膜的好材料。

從哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞中分離細(xì)胞質(zhì)膜，步是收集血液并置于加有抗凝劑的容器內(nèi)，用低速離心的方法從血液中分離得紅細(xì)胞，然后用等滲緩沖液重復(fù)洗滌多次，去除血漿。第二步，將洗凈的紅細(xì)胞從等滲緩沖液轉(zhuǎn)移到低滲緩沖液中，由于滲透壓力作用于細(xì)胞質(zhì)膜，使紅細(xì)胞膨脹而溶血。后一步，將溶血的紅細(xì)胞經(jīng)過充分反復(fù)洗滌，高速離心，去除血紅蛋白和其他細(xì)胞內(nèi)含物。這樣制備所獲得的終產(chǎn)品幾乎全是紅細(xì)胞膜。

二、實(shí)驗(yàn)用品

  （一）器材

（1）冰凍離心機(jī)。

（2）相差顯微鏡。

（二）試劑  

（1）pH7.4的等滲磷酸酸鹽緩沖液

  貯液A：稱取0.780g磷酸二氫鈉溶于水，定容至1000ml。

  貯液B：稱取3.582g磷酸氫二鈉溶于水，定容于2000ml。

取380ml貯液A加1620ml貯液B，用少量濃HCL調(diào)PH至7.4，再稱17.53gNACL溶于其中。

（2）PH7.4低滲Tris.HCL緩沖液：

      貯液A：稱取2.42gTris，溶于水，稀釋至500ml。

      貯液B：取0.84ml36%-38%HCL,稀釋至500ml。

   取500ml貯液A加414ml貯液B，用水稀釋至近于2000ml，用6mol/L HCL調(diào)PH室7.4，再定容至2000ml。

    （3）肝素-PH7.4等滲磷酸鹽緩沖液：將肝素溶在PH7.4等滲磷酸鹽酸緩沖液中，每ml含肝素500單位。

（三）材料

      哺乳動(dòng)物的血液。

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