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  在這部分工作中，我們采用了高 pH 反相色譜結(jié)合二氧化鈦富集以及二氧化鈦富集結(jié)合強(qiáng)陽(yáng)離子交換分級(jí)兩條技術(shù)路線(xiàn)來(lái)對(duì)實(shí)現(xiàn)對(duì) Hela 細(xì)胞的磷酸化蛋白質(zhì)組的深度覆蓋。zui終我們的實(shí)驗(yàn)一共鑒定到了 8,696 個(gè)蛋白質(zhì)上的近 40,000 個(gè)磷酸化位點(diǎn)。
  在二氧化鈦富集結(jié)合強(qiáng)陽(yáng)離子交換分級(jí)的技術(shù)路線(xiàn)中，SCX 分級(jí)的梯度還值得進(jìn)一步優(yōu)化，對(duì)于這種組分較少的預(yù)分級(jí)方法，階梯洗脫會(huì)是一個(gè)更好的選擇。這種大規(guī)模的磷酸化肽段富集方法對(duì)樣品的起始量要求比較高，如果樣品較少的話(huà)，建議采用二氧化鈦富集結(jié)合強(qiáng)陽(yáng)離子交換的策略，一般 2 mg 起始蛋白就能得到較多的磷酸化位點(diǎn)鑒定。ThermoFisher也提供了商業(yè)化的 IMAC 試劑盒（Cat # 88300），鑒于 IMAC 和 TiO2 對(duì)磷酸化肽段富集有著較好的互補(bǔ)性，這兩者聯(lián)用會(huì)對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)組的深度覆蓋達(dá)到更好的效果。