1 范圍
本標(biāo)準規(guī)定了蜂蠟中二十八烷醇、三十烷醇含量的測定方法。
本標(biāo)準適用于蜂蠟中二十八烷醇、三十烷醇含量的測定。
本標(biāo)準檢出限：二十八烷醇的檢出限為0.1% ，三十烷醇的檢出限為0.16%。
2 規(guī)范性引用文件
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GB/T 6379.1 測定方法與結(jié)果的準確度（正確度與精密度）第1部分: 總則與定義
GB/T 6379.2 測定方法與結(jié)果的準確度（正確度與精密度）第2部分: 確定標(biāo)準測定方法重復(fù)性與 再現(xiàn)性的基本方法 GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3 原理
試樣經(jīng)回流水解后，用氯仿提取樣品中的二十八烷醇、三十烷醇，提取液經(jīng)無水硫酸鈉凈化，濾膜 過濾后，氣相色譜火焰離子化檢測器檢測，外標(biāo)法定量。
4 試劑
除非另有說明，均使用分析純試劑，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。
4.1 氫氧化鉀。
4.2 無水硫酸鈉。
4.3 氯仿。
4.4 95%乙醇。
4.5 0.5 mol/L 的氫氧化鉀乙醇溶液；稱取 2.8 g 氫氧化鉀，用 100mL 95%乙醇溶解于塑料瓶中，常溫 密封保存。
4.6 二十八烷醇、三十烷醇標(biāo)準品：純度≥98%。
4.7 二十八烷醇、三十烷醇標(biāo)準儲備液：分別稱取 50 mg 二十八烷醇、三十烷醇標(biāo)準品，至 0.1 mg， 放入同一 100 mL 容量瓶中，加氯仿超聲波溶解后定容。常溫密封環(huán)境下，有效期三個月。
4.8 二十八烷醇、三十烷醇標(biāo)準工作溶液：準確吸取標(biāo)準儲備液（4.7）0.2 mL，1.0 mL，2.0 mL， 5.0 mL，10.0 mL 于 10 mL 容量瓶，用氯仿配制成 10.0 mg/L，50.0 mg/L，100.0 mg/L，250.0 mg/L，500.0 mg/L 的標(biāo)準工作溶液。常溫密封環(huán)境下，有效期一個月。
5 儀器設(shè)備
5.1 氣相色譜儀：配有火焰離子化檢測器（FID）。
5.2 超低溫冰箱（-86℃）。
5.3 高速粉碎研磨儀。
5.4 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.001 g。
5.5 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
5.6 回流裝置。
5.7 超聲波。
6 試樣制備與保存
6.1 試樣的制備 取樣品 200 g 置于超低溫冰箱中，1h 后取出，用粉碎機研磨成粉狀，置于樣品瓶中，密封標(biāo)記。
6.2 試樣的保存 將試樣于-18 ℃保存。
7 測定步驟
7.1 提取
稱取均勻的試樣 0.25 g，至 0.001 g，置于 150 mL 三角瓶中，加入 20 mL 氫氧化鉀溶液（4.5）， 水浴 90 ℃ 回流 2 h， 60 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇后，加入 50 mL 氯仿溶解殘渣，并將溶液全部轉(zhuǎn)移至透 明玻璃離心管中，加入 30 mL 水，漩渦振蕩 1 min，靜置，除去上層液體，再重復(fù)用 30 mL 水清洗兩次 后，將有機相轉(zhuǎn)移至 100 mL 容量瓶中，并用氯仿定容。測定前，取適量溶液經(jīng)無水硫酸鈉干燥，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾，待氣相色譜測定。超過線性范圍的樣品，需要稀釋后重新測定。
7.2 繪制標(biāo)準曲線
吸取標(biāo)準工作液于進樣瓶中，氣相色譜儀測定標(biāo)準溶液的響應(yīng)值（峰面積），以濃度為橫坐標(biāo)、峰面 積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準曲線。
7.3 氣相色譜條件
色譜柱：（5%-苯基)-甲基聚硅氧烷 30 m × 0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25 μm 或相當(dāng)者； 柱溫：200 ℃保持 1 min，以 5 ℃/min 的速率升溫到 320 ℃，保持 10 min； 進樣口溫度：320 ℃； 檢測器溫度：340 ℃； 載氣：氮氣（N2），純度≥99.99%； 燃氣：氫氣（H2），純度≥99.99%； 柱流速：1.0 mL/min； 氫氣流速：30 mL/min； 空氣流速：300 mL/min； 不分流進樣：2 μL。
7.4 氣相色譜測定
取適量試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準工作溶液，作單點或多點校準，以試樣峰與標(biāo)準溶液峰相對保留時間 定性，以色譜峰面積值定量。標(biāo)準工作液及試樣液中的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。標(biāo)準溶 液和試樣溶液的氣相色譜圖見附錄 A。
8 結(jié)果計算
試樣中二十八烷醇、三十烷醇的含量按式（1）計算：

式中：
x―試樣中二十八烷醇、三十烷醇質(zhì)量百分比含量，%；
c―從標(biāo)準曲線中得到的被測組分的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；
v―試樣溶液定容體積，單位為升（L）；
m―試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。
測定結(jié)果取其兩次測定的算術(shù)平均值，計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
9 精密度
9.1 重復(fù)性
在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨立測試結(jié)果差值不得超過重復(fù)性 r。r= 2.8× Sr（重復(fù)性標(biāo)準差）。

9.2 再現(xiàn)性
在再現(xiàn)性條件下，獲得的兩次獨立測定結(jié)果，差值不得超過再現(xiàn)性 R。R= 2.8×SR（再現(xiàn)性標(biāo) 準差）。

二十八烷醇  重復(fù)性限 r 0.40 再現(xiàn)性 R 0.42
三十烷醇     重復(fù)性限 r 0.52  再現(xiàn)性 R 0.53

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