制備液相色譜技術(shù)

     液相色譜技術(shù)自發(fā)明以來(lái)，由于其、高靈敏度等特點(diǎn)，得到了飛速發(fā)展。近年來(lái)，伴隨著生物技術(shù)和精細(xì)化工的發(fā)展，作為液相色譜分支的制備液相色譜也日益受到重視，成為了生物技術(shù)產(chǎn)品和研究中*的手段。

     制備液相色譜按照一次進(jìn)樣量的多少，可以分為3種規(guī)模，即半制備色譜、制備色譜和工業(yè)級(jí)色譜，如表1所示。制備色譜以生產(chǎn)純物質(zhì)為目的，在經(jīng)濟(jì)合理的前提下，規(guī)模越大越好。

表1 制備型HPLC3種規(guī)模

     分析色譜與制備色譜的根本區(qū)別在于分離目的不同。分析色譜，反映的是樣品的組成，追求的是分離和高靈敏度，不需要收集特定的餾分，洗脫液通常作為廢液來(lái)處理。但在制備色譜中，為了節(jié)省投資和操作費(fèi)用，必須以zui少的時(shí)間生產(chǎn)zui大量的產(chǎn)品。由于目的不同，制備色譜與分析色譜所選用的操作參數(shù)，包括色譜柱尺寸、填料、流量、操作壓力、進(jìn)樣量、產(chǎn)品純度、產(chǎn)品回收率、色譜分離效果等的優(yōu)化上有較大的差別。前者要求進(jìn)樣量越小越好，而后者為了提高制備量，柱子必須超載。柱子的超載方式有兩種，一種是 “質(zhì)量超載”，即維持較小的進(jìn)樣體積，提高進(jìn)樣濃度；另一種是 “體積超載”，即保持較小的進(jìn)樣濃度，增加進(jìn)樣體積。在制備色譜中，一般認(rèn)為采用質(zhì)量超載的方式較好。在制備色譜分離過(guò)程中，分離度和柱效均隨著質(zhì)量超載程度的增加而下降。但是，在分離度可以滿(mǎn)足要求的前提下，采用質(zhì)量超載的方式操作，可以提高制備量。

      目前，主要通過(guò)線性放大的原理優(yōu)化從分析到制備過(guò)程的操作參數(shù)。通常假設(shè)分析色譜系統(tǒng)和制備色譜系統(tǒng)的化學(xué)性質(zhì)、傳質(zhì)過(guò)程都保持不變，分析型液相色譜的進(jìn)樣量、流量、收集體積等乘以線性放大系數(shù)便可得制備型液相色譜的相應(yīng)參數(shù)。線性放大系數(shù)即為制備色譜柱和分析色譜柱的截面積之比與柱長(zhǎng)之比的乘積。例如，制備液相的進(jìn)樣量計(jì)算公式為：

Q2=Q1·(r2/r1)2·L2/L1

其中，Q1、r1、L1分別為分析型液相色譜的進(jìn)樣量、色譜柱半徑和柱長(zhǎng)；Q2、r2、L2分別為制備型液相色譜的進(jìn)樣量、色譜柱半徑和柱長(zhǎng)。

     利用線性放大的方法優(yōu)化分析型色譜的操作參數(shù)，直接將其應(yīng)用到直徑更大的制備型色譜柱，不僅可縮短整個(gè)方法開(kāi)發(fā)的時(shí)間，并且可以減少樣品損失，實(shí)現(xiàn)zui有效、zui快速的分離效果。

     目前制備液相色譜技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于制藥，化工和生物工程等領(lǐng)域中樣品的分離和純化。隨著色譜理論逐漸完善，新技術(shù)不斷出現(xiàn)，制備色譜顯示出廣闊的應(yīng)用前景。