賴氨酸(lysine，Lys)含量測定試劑盒說明書
微量法 100 管/96 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。
測定原理：
蛋白質(zhì)中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2，它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸的含量成線性關(guān)系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同，而且僅有—個游離氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制標(biāo)準(zhǔn)液。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BH6010-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑二：液體 | 12.5ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 15ml | 4℃ |
試劑四：60%乙醇（自備） | 1 瓶 | 4℃ |
說明書 | 1 份 |
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。
賴氨酸提取：
樣本烘干粉碎，稱取約 0.01g 樣本，加入 1ml 提取液，充分勻漿。80℃水浴提取 20min，冷卻后 10000g
離心 10min，取上清待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 570nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：取 10ml 試劑一與 10ml 試劑二混合搖勻，取上清備用。用不完的試劑 4℃保存。
3、在有蓋EP 管中加入下列試劑：
試劑名稱（μl） | 測定管 | 空白管 |
樣本 | 100 |
|
提取液 |
| 100 |
工作液 | 200 | 200 |
混勻，80℃水浴 30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至常溫。
混勻，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，于 530nm 波長處記錄吸光值A。△A=A 測定管-A 空白管。空白管只要做一管。
賴氨酸含量計算：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 0.0062x - 0.0212；x 為賴氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。
1. 按照蛋白濃度計算
賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
賴氨酸含量(µg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1ml；V2：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml； W：樣本質(zhì)量，g；1.1515，校正系數(shù)。
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 0.0031x - 0.0212；x 為賴氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。
1. 按照蛋白濃度計算
賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
賴氨酸含量(µg/g 干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1ml；V2：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml； W：樣本質(zhì)量，g；1.1515，校正系數(shù)。
