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原代細(xì)胞的生存受多種因素影響，以下是一些關(guān)鍵要點(diǎn)：

合適的培養(yǎng)環(huán)境

培養(yǎng)基：是為原代細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和維持生存的基礎(chǔ)。不同類(lèi)型的原代細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的需求差異很大，如神經(jīng)細(xì)胞通常需要含有特殊生長(zhǎng)因子和營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，以支持其生長(zhǎng)和分化；而皮膚成纖維細(xì)胞則可以在較為通用的 DMEM 培養(yǎng)基中良好生長(zhǎng)。

溫度：一般來(lái)說(shuō)，來(lái)源于人體和哺乳動(dòng)物的原代細(xì)胞最適培養(yǎng)溫度為 37℃，這與體內(nèi)環(huán)境溫度一致。溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響細(xì)胞的代謝活動(dòng)和生理功能，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

氣體環(huán)境：主要是氧氣和二氧化碳。氧氣是細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸、產(chǎn)生能量的必要條件；二氧化碳對(duì)于維持培養(yǎng)基的 pH 值穩(wěn)定至關(guān)重要。通常細(xì)胞培養(yǎng)需要在含 5% 二氧化碳的培養(yǎng)箱中進(jìn)行，以保證培養(yǎng)基的 pH 值維持在 7.2-7.4 之間。

濕度：培養(yǎng)環(huán)境的濕度應(yīng)保持在 95% 左右，以防止培養(yǎng)基中的水分蒸發(fā)，維持培養(yǎng)基的成分穩(wěn)定和滲透壓平衡。

細(xì)胞接種密度

原代細(xì)胞接種密度過(guò)低，細(xì)胞之間的相互作用減少，可能會(huì)影響細(xì)胞的增殖和存活；接種密度過(guò)高，細(xì)胞會(huì)過(guò)早地接觸抑制，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗過(guò)快，代謝廢物積累過(guò)多，也不利于細(xì)胞的長(zhǎng)期生存。如肝細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)，合適的接種密度可能在每平方厘米 1×10? - 5×10?個(gè)細(xì)胞。

底物和支架

許多原代細(xì)胞具有貼壁生長(zhǎng)的特性，需要合適的底物來(lái)附著和鋪展。細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿表面通常經(jīng)過(guò)特殊處理，以增加細(xì)胞的貼壁能力。對(duì)于一些特殊細(xì)胞，還需要使用細(xì)胞外基質(zhì)成分如膠原蛋白、纖連蛋白等進(jìn)行包被，為細(xì)胞提供更接近體內(nèi)的微環(huán)境，促進(jìn)細(xì)胞的附著和生長(zhǎng)。

避免污染

無(wú)菌操作：在原代細(xì)胞培養(yǎng)的整個(gè)過(guò)程中，必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則。實(shí)驗(yàn)人員要穿戴無(wú)菌工作服、口罩、手套等，實(shí)驗(yàn)器材和培養(yǎng)基等都要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的滅菌處理。

檢測(cè)和預(yù)防：定期對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行微生物污染檢測(cè)，包括細(xì)菌、真菌、支原體等。一旦發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)立即采取措施，如丟棄受污染的細(xì)胞培養(yǎng)物，對(duì)培養(yǎng)環(huán)境和器材進(jìn)行chedi消毒等。

生長(zhǎng)因子和激素

許多原代細(xì)胞的生長(zhǎng)和生存依賴(lài)于特定的生長(zhǎng)因子和激素。如表皮生長(zhǎng)因子（EGF）可以促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖和分化；胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）對(duì)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝具有調(diào)節(jié)作用。在培養(yǎng)原代細(xì)胞時(shí)，需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型添加相應(yīng)的生長(zhǎng)因子和激素，以維持細(xì)胞的正常生理功能和生存。

原代細(xì)胞的生存需要在各個(gè)環(huán)節(jié)精心把控，為細(xì)胞提供最適宜的條件，才能保證細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和用于各種科學(xué)研究及應(yīng)用。