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【預(yù)期用途】：HPV 18 假病毒(GFP)可以用于HPV抗血清或者中和抗體滴度檢測(cè)

【主要成分】：Brij58、Benzonase、Plasmid Safe、DPBS-Mg、NaCI、葡萄糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二的鈉、氯化的鉀和假病毒。

【存儲(chǔ)條件及有效期】：凍存于-75±5℃以下，有效期大于12個(gè)月。

【使用方法】：HPV 18 假病毒(GFP)

1.收集對(duì)數(shù)生長期的293FT細(xì)胞，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，用DMEM培養(yǎng)液（含10%胎牛血清、0.1mM非必需氨基酸、6mM L-谷氨酰的胺、1mM丙酮酸鈉、1%青鏈霉的素的DMEM高糖培養(yǎng)基）稀釋細(xì)胞濃度至1.5×l05個(gè)/mL。將細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，100μl/孔。放CO2培養(yǎng)箱中孵育4-6h后用于假病毒的感染。

2.假病毒稀釋：取出凍存的假病毒置于冰上融化或4±1℃或常溫條件下自然融化，待其融化后，將假病毒使用DMEM培養(yǎng)基（含10%的胎牛血清）稀釋到工作濃度。因假病毒對(duì)不同細(xì)胞的感染效率不同，正式實(shí)驗(yàn)前建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最適病毒量 (產(chǎn)品標(biāo)簽上標(biāo)明了參考滴度,優(yōu)先推薦的病毒稀釋倍數(shù)=參考滴度/2)。

3.待測(cè)樣品和假病毒的預(yù)混 ：取新的 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入55μl樣品和55μl假病毒稀釋液，輕拍四周混勻，同時(shí)設(shè)培養(yǎng)液替代樣品的假病毒對(duì)照孔和無樣品無假病毒的空白對(duì)照孔。

4.待測(cè)樣品和假病毒混合液的預(yù)孵育 ：將 96 孔培養(yǎng)板 4℃冰箱放置 1 小時(shí)。

5.假病毒感染：從 96 孔培養(yǎng)板各孔中吸取 100μL 的假病毒和待測(cè)樣品組合物及對(duì)照，貼壁緩緩加入提前已鋪好細(xì)胞的培養(yǎng)板對(duì)應(yīng)孔中，輕拍培養(yǎng)板四周混勻。

6.感染檢測(cè)：細(xì)胞感染假病毒第三天,通過觀察綠色熒光蛋白表達(dá)的活性判定感染效率。

7.為了更好的保持產(chǎn)品活性，假病毒產(chǎn)品盡量減少反復(fù)凍融，建議客戶收到產(chǎn)品后，使用DMEM培養(yǎng)基（含10%的胎牛血清）稀釋到1ml，然后分裝成50μl的小包裝后凍存于-75±5℃保存，分次使用（也可以依據(jù)客戶自身實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行分裝）。

【注意事項(xiàng)】：

1.我們提供的HPV假病毒為復(fù)制缺陷型病毒，即該病毒感染目的細(xì)胞后不會(huì)利用宿主細(xì)胞產(chǎn)生新的病毒顆粒；

2.實(shí)驗(yàn)操作需要在生物安全柜條件下進(jìn)行，并穿戴好實(shí)驗(yàn)服、口罩和手套等個(gè)人防護(hù)用品；

3.如果實(shí)驗(yàn)時(shí)本品不慎濺出，請(qǐng)立即使用84消毒液對(duì)其進(jìn)行滅活處理，如果濺到眼睛、皮膚或其他身體部位請(qǐng)立即使用大量清水沖洗；

4.使用本品所產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)廢棄物需要通過高壓滅菌處理后按照醫(yī)療廢棄物處理要求進(jìn)行處理。

5.博奧龍HPV假病毒產(chǎn)品滴度定義方式：使用儀器讀數(shù)（酶聯(lián)免疫熒光斑點(diǎn)分析儀，CTL，S6 Universal），以讀數(shù)為700時(shí)（可以表示為儀器檢測(cè)的范圍內(nèi)700個(gè)細(xì)胞有熒光），當(dāng)前假病毒稀釋倍數(shù)為該批次產(chǎn)品的滴度值。