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小鼠膽管類器官擴(kuò)增培養(yǎng)試劑盒

MCE 國(guó)際站：Mouse Liver Ductal Organoid (expansion) Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.

簡(jiǎn)介：MCE 小鼠膽管類器官擴(kuò)增培養(yǎng)試劑盒包含膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A，培養(yǎng)添加物 B (50x) 以及培養(yǎng)添加物 C (250x)。該產(chǎn)品可有效構(gòu)建小鼠膽管類器官。

概述：MCE 小鼠膽管類器官擴(kuò)增培養(yǎng)試劑盒包含膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A、培養(yǎng)添加物 B (50x)以及培養(yǎng)添加物 C (250x)。該產(chǎn)品可用于有效構(gòu)建小鼠膽管類器官。小鼠膽管類器官可以為相關(guān)疾病的研究、藥物篩選、毒理檢測(cè)等提供有用的模型，成為推動(dòng)再生醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要工具。

描述：

•   MCE 小鼠肝導(dǎo)管類器官試劑盒包含小鼠肝導(dǎo)管類器官（擴(kuò)增）基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A、小鼠肝導(dǎo)管類器官（擴(kuò)增）補(bǔ)充物 B（50 倍）、小鼠肝導(dǎo)管類器官（擴(kuò)增）補(bǔ)充物 C（250 倍），本產(chǎn)品可用于高效構(gòu)建小鼠肝導(dǎo)管類器官。

•   小鼠肝導(dǎo)管類器官可用于疾病模型、器官發(fā)育、藥物篩選、個(gè)性化醫(yī)療、毒理學(xué)等多種應(yīng)用，并具有在再生生物學(xué)中的應(yīng)用潛力。

操作說(shuō)明：1. 配制小鼠膽管類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基冰上結(jié)凍小鼠膽管類器官培養(yǎng)添加物 B、小鼠膽管類器官培養(yǎng)添加物 C，按下列組分配制小鼠膽管類器官培養(yǎng)基，充分混勻后置于冰上備用。2. 提取原代組織細(xì)胞a. 使用預(yù)冷的原代組織儲(chǔ)存液浸泡新鮮提取的原代小鼠肝臟組織，并置于 4°C 冰箱中暫時(shí)保存。b. 在保證無(wú)菌條件下，使用小鼠膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗干凈去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代小鼠肝臟組織，直到上清澄清。然后在細(xì)胞培養(yǎng)皿中用無(wú)菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為約 2 mm 的碎片，隨后轉(zhuǎn)移至含有 10 mL 預(yù)冷 1% FBS 小鼠膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 的 15 mL 錐形管中。c. 取適量小鼠膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 加入 FBS 制備 10% FBS 培養(yǎng)基，在后續(xù)步驟中，使用 10% FBS 培養(yǎng)基潤(rùn)洗 10 mL 移液管的內(nèi)表面以避免組織粘在移液管壁上。d. 用 10 mL 移液管清洗組織碎片樣品至少 10 次，靜置錐形管使樣品沉淀在底部，用 10 mL 移液管吸去上清。e. 加入適量組織消化液，消化液體積不超過錐形管體積的三分之二。在 37°C 下?lián)u床低速孵育一定時(shí)間，一般不超過 30 分鐘，密切關(guān)注消化情況。f. 一旦導(dǎo)管結(jié)構(gòu)出現(xiàn)，往組織消化混合液中加入適量 FBS 以終止消化，F(xiàn)BS 終濃度為 2%，然后輕輕地吹打混勻。靜置 2 分鐘，收集上清液。g. 靜置 2 分鐘，收集上清液。h. 加入 10 mL 小鼠膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A，再次靜置 1-2 分鐘，收集上清液。重復(fù)該步驟 1-2 次。i. 收集到的細(xì)胞沉淀置于冰上備用。2. 構(gòu)建類器官a. 在冰上將收集的原代組織細(xì)胞重懸于基質(zhì)膠中，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 200-500 個(gè)導(dǎo)管。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞，如需稀釋，請(qǐng)確保基質(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。b. 將混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘進(jìn)行固化。c. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個(gè)孔邊緣緩慢注入 500 μL 提前制備好的小鼠膽管類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中。d. 密切關(guān)注類器官生長(zhǎng)狀態(tài)，每隔 3 天更換一次培養(yǎng)基。一般情況下，5-8 天可觀察到小鼠膽管類器官生成，并進(jìn)行第一次傳代。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養(yǎng)基，向孔中加入 500 μL 預(yù)冷小鼠膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A，使用細(xì)胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)容物剝離出培養(yǎng)板并轉(zhuǎn)移至 1.5 mL EP 管內(nèi)。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質(zhì)膠分離，在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘收集沉淀。隨后加入 1 mL 小鼠膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 重懸并輕柔地進(jìn)行充分吹打，使類器官分散為碎片。如類器官難以吹打成碎片可使用 0.2-0. 5 mL 類器官消化液置于 37°C 培養(yǎng)箱中充分消化，一般不超過 3 分鐘，隨后加入 5 倍消化液體積的小鼠膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 終止消化。c. 在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘。離心完畢，棄上清，用小鼠膽管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用。d. 在冰上將收集的細(xì)胞重懸于基質(zhì)膠中，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 200-500 個(gè)導(dǎo)管。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞，如需稀釋，請(qǐng)確?；|(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。e. 將混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘進(jìn)行固化。f. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個(gè)孔邊緣緩慢注入 500 μL 預(yù)熱的小鼠膽管類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中。g. 密切關(guān)注類器官的生長(zhǎng)狀態(tài)，記錄多個(gè)視野中的膽管類器官的形態(tài)和分布。

注意事項(xiàng)：1. 配制后的培養(yǎng)基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周。2. 提取原代組織細(xì)胞時(shí)需保持全程無(wú)菌，避免造成后續(xù)實(shí)驗(yàn)污染。3. 類器官傳代消化時(shí)需時(shí)刻觀察碎片狀態(tài)，出現(xiàn)小細(xì)胞團(tuán)（10-50 個(gè)細(xì)胞）時(shí)應(yīng)終止消化，避免時(shí)間過長(zhǎng)影響類器官后續(xù)生長(zhǎng)活力。4. 基質(zhì)膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細(xì)胞重懸后應(yīng)將其迅速注入細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)，盡量避免產(chǎn)生氣泡。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：Mitotane  | DMAT  | Retapamulin  | Synta66  | Benfluorex (hydrochloride)  | Schisantherin A  | Pretomanid  | DTE  | Paroxetine  | Neophytadiene

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