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SYBR Green I 核酸膠染料

MCE 國(guó)際站：SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件： -20℃ 避光保存 一年

簡(jiǎn)介：SYBR Green I 是一種可代替溴化乙錠（EB）的新型花青類(lèi)核酸染料，毒性很低，使用安全，小則可以檢出 20 pg 的 dsDNA。

概述：SYBR Green I 是一種可代替溴化乙錠 (EB) 的新型花青類(lèi)核酸染料，毒性很低，使用安全。SYBR Green I 小則可以檢出 20 pg 的 double-stranded DNA(dsDNA) (254 nm)，靈敏度高于溴化乙錠 (EB) 檢測(cè)方法。SYBRGreen I 還可以用于檢測(cè)寡核苷酸，靈敏度同樣高于 EB。在采用瓊脂糖電泳或聚丙烯酰胺電泳方法檢測(cè) dsDNA 時(shí)，SYBR Green I 是靈敏的熒光染料之一。SYBRGreen I 與核酸結(jié)合后的最大吸收峰為 490 nm，另外，在紫外區(qū) 290 nm 和 380 nm 處也有吸收峰。在紫外透射光下與核酸結(jié)合后呈綠色熒光，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 520 nm，可使用可見(jiàn)光凝膠透射系統(tǒng)或紫外凝膠透射系統(tǒng)觀測(cè)。SYBR Green I 用于電泳檢測(cè) DNA 時(shí)，既可在電泳前進(jìn)行染色 (預(yù)染染色法)，也可電泳后再進(jìn)行染色 (后染染色法)

描述：

SYBR Green I 核酸凝膠染料是一種專(zhuān)有的非對(duì)稱(chēng)花青染料，已被證明對(duì)需要靈敏核酸檢測(cè)的檢測(cè)非常有用。SYBR Green I 染料在 490 nm 處最大激發(fā)，在 290 nm 和 380 nm 處有次級(jí)激發(fā)峰。與 DNA 結(jié)合的 SYBR Green I 染料的熒光發(fā)射集中在 520 nm。使用 SYBR Green I 染料的檢測(cè)限低至每條 dsDNA 帶 60 pg（使用 300 nm 透射）。使用 254 nm 落射照明，可以檢測(cè)到少至 20 pg 的 dsDNA。 SYBR Green I Stain 對(duì) dsDNA 具有較好的親和力，因此也可在電泳前對(duì) dsDNA 進(jìn)行染色。

•   靈敏度高：每條帶可檢測(cè)到少至 20 pg 的 dsDNA

•   信噪比高：樣本熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低

•   適用性強(qiáng)：適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色

•   無(wú)需脫色或洗滌步驟，可與不同的檢測(cè)設(shè)備兼容

操作說(shuō)明：1) 預(yù)染染色法a. 制膠：根據(jù)需要配制適當(dāng)濃度 (0.8-3.0%) 的瓊脂糖膠液。在瓊脂糖融解后，適當(dāng)冷卻但未凝固時(shí)，按照每 100 mL 膠液加入 10 μL SYBRGreen I 的比例 (10,000:1) 加入SYBR Green I?；靹蚝蠹纯砂循傊悄z液倒入制備凝膠的模具中。b. 樣品、Marker 預(yù)染：將 SYBRGreen I 與 6× Loading Buffer 按照 1:9 的比例混合 (如 5 μL 的染料與 45 μL 的 6× Loading Buffer 混合)，獲得 Loading Buffer 預(yù)染液。將核酸樣品和 Marker 分別與 Loading Buffer 預(yù)染液按 5:1 的比例混合，室溫孵育 3 min 左右。注：1. 含有 SDS 的 Loading Buffer 會(huì)影響電泳結(jié)果，建議使用不含 SDS 的 Loading Buffer。 2. 由于SYBR Green I 靈敏度高，核酸樣品量較大時(shí)可能會(huì)使條帶分不清，所以建議品質(zhì)較好的 Marker 和濃度較高的樣品可以適當(dāng)稀釋后使用 (一般2 μL 配制好的 Loading Buffer 預(yù)染液對(duì) DNA 的有效承載量為 100-500 ng)。c. 按常規(guī)方法上樣電泳，電泳結(jié)束后即可在紫外或藍(lán)光照射下觀察。2) 后染染色法a. 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳，不需要在制膠時(shí)加 SYBR Green I。b. 用 pH 7.5-8.0 的緩沖液 (例如 TAE、TBE 或 TE)，按照一定比例稀釋 SYBR Green I (瓊脂糖凝膠電泳按 1:10,000 或 2:10,000 的比例稀釋?zhuān)痪郾┠z電泳按 3:10,000 或 4:10,000 的比例稀釋)，輕輕震蕩混勻，即成染色液。染色液一周內(nèi)，避光低溫儲(chǔ)存應(yīng)至少可用 4 次。c. 將凝膠浸入染色液中，室溫避光震蕩染色 30-60 min。染色時(shí)間根據(jù)膠濃度及厚度確定，凝膠越厚或濃度越高，所需的染色時(shí)間越長(zhǎng)。d. 染色結(jié)束后即可直接在紫外或藍(lán)光照射下觀察。

注意事項(xiàng)：1) 本公司提供的 SYBR Green I 染料產(chǎn)品溶解于 DMSO 中，從冰箱取出后應(yīng)恢復(fù)至室溫，充分融化并混勻后使用。為了減少損失，開(kāi)蓋請(qǐng)先離心沉積至管底部。2) SYBR Green I 染料對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定的親和力，建議在稀釋、儲(chǔ)存、染色等使用過(guò)程中使用聚丙烯類(lèi)容器。3) SYBR Green I 檢測(cè) single-strand DNA (ssDNA) 和 RNA 時(shí)，其靈敏度有所下降。4) 采用常規(guī)用酒精沉淀核酸的操作即可將全部的 SYBR Green I 染料從雙鏈核酸上去掉。5) SYBRGreen I 的致突變性明顯比 EB 低得多，目前尚無(wú)關(guān)于SYBR Green I 染料對(duì)人體的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)，但仍是一種潛在的誘變劑，請(qǐng)注意防護(hù)。6) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套和口罩操作。7) 本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

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