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原代細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑

貨號：T2120

存儲條件：: 4-8℃保存，有效期一年。每次使用之前請先將本品上下顛倒混勻。

產(chǎn)品說明：

LabFect Plasmid原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑是專門用于原代細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染試劑。LabFect Plasmid 具有非常卓yue的轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染多種原代細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率高達70% 以上（EGFP質(zhì)粒）。LabFect Plasmid不僅可轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒DNA，還可轉(zhuǎn)染RNA和小分子DNA。與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，LabFect Plasmid 采用生物可降解材料配制，對細(xì)胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率不到10%。LabFect Plasmid 使用也非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡便。。

產(chǎn)品特點：

卓yue的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種原代細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率高達70%以上；

極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死 亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對實驗結(jié)果的影響，實驗結(jié) 果更為客觀；

操作簡便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。

注意事項：

因細(xì)胞密度隨細(xì)胞系不同會有很大差別，且細(xì)胞密度直接決定轉(zhuǎn)染效率，因此請在轉(zhuǎn)染過程中盡量保持同樣的接種比例，以提高轉(zhuǎn)染重復(fù)性。多數(shù)哺乳動物細(xì)胞應(yīng)在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。其他的一些細(xì)胞系，例如昆蟲細(xì)胞，需要在不同的溫度和CO2濃度下進行培養(yǎng)。請根據(jù)具體細(xì)胞系選擇最shi培養(yǎng)條件。應(yīng)避免包裝反應(yīng)體系中存在血清，因血清會干擾LabFect與DNA形成復(fù)合物 。如果轉(zhuǎn)染DNA量較大或者當(dāng)復(fù)合物包裝時反應(yīng)體系中出現(xiàn)沉淀時, 請將包裝反應(yīng)體系調(diào)整至1ml進行。

適用細(xì)胞系：大鼠肝細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮 細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、大腸癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞等

試劑盒內(nèi)容物：LabFect原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑

方法步驟（以24孔板轉(zhuǎn)染為例）:

1. 細(xì)胞接種:

a. 轉(zhuǎn)染前24小時左右對細(xì)胞進行鋪板（不含抗生素），培養(yǎng)過夜；

b. 確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度達90%-95%。

2. LabFect/DNA復(fù)合物包裝(該步完成后應(yīng)立即轉(zhuǎn)染):

a. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基，并添加適量的轉(zhuǎn)染試劑(參見附表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

b. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基，并添加適量的 DNA，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。 (參見附表。首ci使用建議在附表提供的DNA和轉(zhuǎn)染試劑參考量的基礎(chǔ)上進行優(yōu)化實驗，以摸索兩者之間的最you搭配比例)。

c. 將LabFect-培養(yǎng)基混合物滴加至DNA-培養(yǎng)基混合物中，用移液器 輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。注意： LabFect-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。

3. 轉(zhuǎn)染:

注意：LabFect在*培養(yǎng)基中(基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加血清)具有最gao的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清培養(yǎng)基。 a. 如特殊情況，可在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大、營養(yǎng)不足導(dǎo)致的細(xì)胞死亡。

b. 將步驟2制備的復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中。輕輕晃動培養(yǎng)皿以使復(fù)合物均勻分布。

c. 培養(yǎng)4h后，加入1ul溶液A，輕搖混勻（此步可選，溶液A另購）。

d. 過夜培養(yǎng)24~48小時。

e. 注意:如果轉(zhuǎn)染后需要更換新鮮培養(yǎng)基，請于加入LabFect/DNA復(fù)合物12~24小時后進行。培養(yǎng)基更換后，孵育24~48小時后再進行后續(xù)實驗。

f. 收獲細(xì)胞，進行后續(xù)實驗。

質(zhì)量控制

本產(chǎn)品經(jīng)嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗證明，無生物污染

注意：

本產(chǎn)品僅用于科研實驗

附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件