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貨物所在地：北京北京市
更新時間：2025-04-07 21:00:08
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NcoI 快速內(nèi)切酶
產(chǎn)品貨號：F5550S
儲存條件：-20℃
同裂酶：Bsp19I
注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。
產(chǎn)品組成
組分 | 規(guī)格 |
LabFD™ NcoI | 30ul |
10×LabFD™ Buffer | 1ml |
10×LabFD™ Color Buffer | 1ml |
產(chǎn)品簡介
LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶，適用于質粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點：5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體系；良好的酶活冗余度，輕松應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有baifenzhibai活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體驗。
建議反應條件
1×LabFD™緩沖液；
37℃溫育；
參照“DNA快速酶切流程"配制反應體系。
失活條件
80℃溫育 20 min。
質量控制
功能活性檢測
最shi反應溫度下，在20ul反應體系中，1ul LabFD™ NcoI能夠在15min內(nèi)*消化1ugλDNA。
超長時間溫育檢測
最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ NcoI與1ugλDNA共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。
酶切-連接-再酶切檢測
最shi反應溫度下，使用1ul LabFD™ NcoI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測
最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ NcoI與1ug超螺旋質粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。
藍白斑檢測
將含有單一lacZα基因的載體以1ul LabFD™ NcoI消化，重新連接后轉化入大腸桿菌感受態(tài)細胞，涂布在含有對應抗生素、IPTG和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產(chǎn)物將得到白色菌落。對于LabFD™系列限制酶而言，白色菌落比例應小于1%。
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