材料與儀器
植物組織
Trizol 氯仿 異丙醇 乙醇 DEPC處理過的水 液態(tài)N2 NaCl 檸檬酸鈉
轉(zhuǎn)子-定子均化器 研缽和杵 圓錐形管
步驟
一、材料
1. 緩沖液、溶液和試劑
Trizol(Invitrogen)氯仿
異丙醇
乙醇，70%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 處理過的水配制
DEPC 處理過的水、
液態(tài) N2
NaCl,1.2mol/L
檸檬酸鈉,0.8mol/L
2. 特殊設(shè)備
轉(zhuǎn)子-定子均化器（或相當(dāng)?shù)模?/span>
研缽和杵，在 DEPC 處理過的水中洗滌，液氮中預(yù)凍
50 ml 圓錐形管，例如 Falcon
3. 細胞和組織
合適的植物組織
二、方法
1. 液氮預(yù)凍過的研缽中研磨約 1g 植物組織，操作時使用足夠的液氮淹沒植物組織。
將組織研磨成很細的粉末，這點很重要。
2. 將粉末轉(zhuǎn)移到 50 ml 圓錐形管中，管中已按每克組織 10 ml 的量加入 Trizol。
3. 使用轉(zhuǎn)子-定子均化器均質(zhì)化組織 30s。
4.4°C 下 1500 g 離心裂解產(chǎn)物 15 min 以移去殘渣。
5. 將上清液轉(zhuǎn)移到一新管中。每毫升 Trizol 加 200ul 氯仿。
6. 將管顛倒數(shù)次以混合。室溫下溫育 5 min。
7.4°C 下 1500 g 離心 20 min。將上清液轉(zhuǎn)移到一新的 50 ml 管中。
8. 加 0.5 倍體積異丙酵和 0.5 倍體積的 0.8mol/L 檸檬酸鈉、1.2mol/L 氯化鈉溶
例如，對 500ul 體積的液相而言，應(yīng)加 250ul 異丙醇和 250ul 檸檬酸鈉溶液。
9 混合，室溫下溫育 1min。于-20°C 保存過夜可提高 RNA 產(chǎn)量。
10.4°C 下 1500 g 離心 20 min。
11. 移棄上清液，每毫升 Trizol加 lml70% 乙醇，以進行初步抽提。
12.1500 g 離心 15 min。小心移棄上清液，避免擾動沉降物。將沉降物風(fēng)干。
13. 將 RNA 溶解于 DEPC 處理過的水中。
lg 成熟葉組織的 RNA 產(chǎn)量可達 500ug。
這個方案對含多酚化合物或樹脂的植物組織可能不適用。對富含多酚、樹脂或淀粉的提取困難的植物組織，推薦使用 ConcertPlantReagent(Invitrogen)。
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