C4色譜柱是一款適合于蛋白質(zhì)分離分析用的產(chǎn)品。它使用3微米粒徑的硅膠填料，優(yōu)化了孔徑，固定相配體的烷基鏈長及表面鍵合密度，可實現(xiàn)高分辨率和高回收率的分析。使用短柱可以在高流速下實現(xiàn)快速分析。
C4色譜柱在使用前，先進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。
在做柱性能測試時要按照C4色譜柱出廠報告中的條件進行，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理：
?、傧仁褂昧鲃酉嗳芙鈽悠?；
②使用預(yù)處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)；
③使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
?、倭鲃酉鄬悠肪哂幸欢ǖ娜芙饽芰ΓＷC樣品組分不會沉淀在柱中；
?、诹鲃酉嗯c樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)；
③流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命；
④流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制；
?、萘鲃酉喾悬c不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進行；
?、拊诹鲃酉嗯渲坪煤?，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇：
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的C4色譜柱，要追求較佳柱效，使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的C4色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
當(dāng)選用較佳流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間。
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