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l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來(lái)源

國(guó)家資源庫(kù)

l 細(xì)胞背景

人白血病T淋巴細(xì)胞，Jurkat細(xì)胞由Schneider建立，來(lái)源于一個(gè)14歲的男孩的外周血。最初命名為 JM。該細(xì)胞系是從 Kendall Smith 博士從 Jurkat-FHCRC細(xì)胞株中獲得一個(gè)克隆，不含支原體。經(jīng)佛波酯(phorbol esters)和外源凝集素（lectins）或抗T3單克隆抗體（需要兩種物質(zhì)共同誘導(dǎo)）誘導(dǎo)后可產(chǎn)生大量IL-2。

l 細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：T淋巴細(xì)胞；急性T細(xì)胞白血病

2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞,懸浮生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備  1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基           （awcell-0002）                87%

    優(yōu)質(zhì)胎牛血清                   （awcell-0500）               10%

    GlutaMAX-1谷氨酰胺             ( awcell-0900 )                 1%

    Sodium Pyruvate丙酮酸鈉         ( awcell-01100 )                1%

P/S青霉素-鏈霉素              （awcell-15140-122）             1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)：

參考傳代周期：

不超過300萬(wàn)細(xì)胞/ mL，建議將活細(xì)胞密度控制在10萬(wàn)-100萬(wàn)/ mL之間參考傳代密度：10萬(wàn)活細(xì)胞/ mL,參考換液頻率：2-3天。

注意：

a）該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)以及客戶的反饋，傳代時(shí)使用【半換液法】對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。同時(shí)，您在收到細(xì)胞后，請(qǐng)不要通過離心的方式收集細(xì)胞，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。

b）該細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量較為敏感，建議您使用進(jìn)口優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)，傳代時(shí)請(qǐng)注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加*培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×106個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。