提起細(xì)胞培養(yǎng)，相信很多老師都遇到過培養(yǎng)液中的“小黑點(diǎn)"，因無法確定它的身份而頭痛不已。本期細(xì)胞學(xué)堂將為大家揭秘這些黑點(diǎn)究竟是什么，幫助您快速上手開展實(shí)驗(yàn)。
01
血清沉淀
血清在融解過程中會(huì)產(chǎn)生大量的析出物，呈現(xiàn)出小顆粒樣的東西，甚至呈纖維樣，這是由于血清融解后導(dǎo)致的蛋白、鹽類物質(zhì)的析出。
血清融解時(shí)混勻 血清靜置融解不混勻，出現(xiàn)黑點(diǎn)
顯微鏡下的血清沉淀物
影響因素
通常血清析出物的多少與融解方法有關(guān)。通過4℃冰箱解凍和溶解過程持續(xù)搖晃混勻，可以有效避免沉淀產(chǎn)生，而37℃靜置混勻則會(huì)有較多沉淀物析出。
處理方法
血清沉淀產(chǎn)生后應(yīng)離心去除部分沉淀，否則在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)會(huì)看到較多黑點(diǎn)和雜質(zhì)類物質(zhì)，影響判斷。
02
細(xì)胞碎片或者分泌物
在細(xì)胞代謝過程中，細(xì)胞凋亡后會(huì)產(chǎn)生一些分泌物的沉積和碎片物質(zhì)，在顯微鏡下呈黑點(diǎn)狀。
顯微鏡下的細(xì)胞碎片及分泌物
特征
①
細(xì)胞碎片大小不均一，會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間少量增多，但是不會(huì)呈倍增的趨勢增多；
②
細(xì)胞狀態(tài)差時(shí)碎片會(huì)較多，狀態(tài)變好后黑點(diǎn)減少；
③
細(xì)胞分泌物情況根據(jù)細(xì)胞有區(qū)別，有的細(xì)胞不產(chǎn)生分泌物，有的細(xì)胞會(huì)有較多的分泌物，往往是不影響細(xì)胞形態(tài)和增殖速度。
03
外源微生物污染
當(dāng)細(xì)胞被支原體、黑膠蟲或者細(xì)菌污染時(shí)，往往也會(huì)產(chǎn)生很多小黑點(diǎn)，尤其是細(xì)菌污染的情況出現(xiàn)時(shí)，這些小黑點(diǎn)甚至?xí)?dǎo)致培養(yǎng)液渾濁。
細(xì)胞支原體污染，黑點(diǎn)較多
細(xì)胞加入支原體清除試劑第二天，黑點(diǎn)顯著變少
如何區(qū)分是否為污染？
1
外源微生物污染
支原體和黑膠蟲污染一般表現(xiàn)為黑點(diǎn)增多并伴隨細(xì)胞生長速度變慢、死細(xì)胞增多等現(xiàn)象，通常加入對應(yīng)清除試劑后細(xì)胞狀態(tài)會(huì)有顯著改善。
2
細(xì)胞分泌物/細(xì)胞碎片
細(xì)胞分泌物和細(xì)胞碎片則不會(huì)因?yàn)榧尤肭宄噭┖蠖纳?，?huì)持續(xù)存在且不影響細(xì)胞增長。
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