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Oxoid 李斯特菌增菌肉湯

李斯特氏菌屬（Listeria ）普遍存在于環(huán)境中，其中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌是人類致病菌。李斯特菌經(jīng)常在即食食品、熱狗、熟食、未消 毒的乳制品、冰淇淋、蔬菜、發(fā)酵臘腸、生肉、家禽等食品中風(fēng)險較大。在干燥，25%鹽濃度，冷藏，冷凍和熱處理的情況下能存活。

Oxoid提供各種李斯特菌增菌肉湯、選擇性培養(yǎng)基、顯色培養(yǎng)基：

緩沖李斯特菌增菌肉湯（BLEB）Buffered Listeria Enrichment Broth(BLEB)用于檢測單增李斯特菌的選擇性增菌培養(yǎng)基，適用于環(huán)境樣品和發(fā)酵產(chǎn)品，CM0897加添加劑SR0141E或SR0213E：

緩沖李斯特菌增菌肉湯 CM0897：

配方表：

*可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)需要自行調(diào)整

李斯特菌選擇性增菌添加劑 SR0141E：

改良李斯特菌選擇性增菌添加劑 SR0213E：

使用方法：

將23.5g的CM0897加入到500ml無菌水中，混勻以溶解。將1瓶SR0141E或SR0213E按照說明書溶解，加入上述培養(yǎng)基中。121℃滅菌15分鐘。冷卻到50℃，混勻倒平板。

技術(shù)要點：

1、將25g或25ml樣品加入225ml緩沖李斯特菌增菌肉湯中，如果需要的話就混勻；

2、經(jīng)過24和48小時培養(yǎng)后，將緩沖李斯特菌增菌肉湯中的微生物轉(zhuǎn)移到李斯特菌瓊脂平板上：（1）直接倒注在平板上（2）將1ml的BLEB加入9ml的0.5的KOH中，混勻，涂布在平板上。

注意，合適的再培養(yǎng)基的瓊脂有：Oxford李斯特菌選擇性培養(yǎng)基，CM0856加SR0140E；PALCAM培養(yǎng)基，CM0877B加SR0150E。

質(zhì)控：

陽性對照 Listeria monocytogenes ATCC® 19117   渾濁生長

陰性對照 Enterococcus faecalis ATCC® 29212    抑制

李斯特菌選擇性增菌培養(yǎng)基  (Listeria Selective Enrichment Medium)

符合FDA配方的李斯特菌增菌培養(yǎng)基，被推薦用于從食品中選擇性增菌李斯特菌

CM0862B加添加劑（SR0141E，SR0213E或SR0149A三選一）：

李斯特菌增菌肉湯 CM0862：

*可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)需要自行調(diào)整配方

改良李斯特菌選擇性增菌添加劑 SR0149A，每小瓶配2.25L培養(yǎng)基：

產(chǎn)品描述：

Oxoid 李斯特菌增菌肉湯CM0862的配方是由Lovett發(fā)表的配方而來，被推薦用于從食品中選擇性增菌李斯特菌，這種增菌方法可以使生牛奶中低于10 cfu/ml的李斯特菌復(fù)蘇。

為了獲得更高的提取率，將培養(yǎng)1天，2天，7天后的增菌肉湯接種到瓊脂培養(yǎng)基上，Agello的文獻(xiàn)中顯示，7天增菌培養(yǎng)后，牛奶和奶制品中的受環(huán)境限制的李斯特菌可以獲得更好的復(fù)蘇率。

技術(shù)要點同上文

質(zhì)控：

陽性對照 Listeria monocytogenes ATCC® 7644     渾濁生長

陰性對照 Enterococcus faecalis ATCC® 29212    抑制

Fraser肉湯 (Fraser Broth)

用于從食品和環(huán)境樣本中分離李斯特菌的二次選擇性診斷增菌肉湯，CM0895加添加劑SR0156E：

Half Fraser肉湯 (Half Fraser Broth)

李斯特菌的選擇性初增肉湯，CM0895加添加劑SR0166：

Fraser肉湯基礎(chǔ) CM0895

配方表

 *可跟進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)需要自行調(diào)整配方，pH不隨添加劑的加入而改變      

Fraser添加劑 SR0156E，每小瓶配500ml培養(yǎng)基：

將28.7g的CM0895加入500ml無菌水中，混勻溶解，121℃滅菌15分鐘，冷卻到50℃后加入已按照說明書溶解好的1瓶SR0156E，混勻后倒平板。

Half Fraser添加劑 SR0166：

將12.9g的CM0895加225ml無菌水中，混勻溶解，121℃滅菌15分鐘，冷卻到50℃后加入已按照說明書溶解好的1瓶SR0166E，混勻后倒平板。或者用129.0g的CM0895配1瓶SR0166G。

產(chǎn)品描述：

Fraser肉湯是對UVM二次增菌肉湯（USDA-FSIS 標(biāo)準(zhǔn)）的改進(jìn)版，它含有檸檬酸鐵銨和氯化鋰，會使培養(yǎng)基變黑。培養(yǎng)基變黑是有李斯特菌生長的證據(jù)。所有的Fraser增菌產(chǎn)物都要經(jīng)過瓊脂平板再次培養(yǎng)。

Fraser肉湯對于檢測環(huán)境和食品樣品中的李斯特菌非常準(zhǔn)確，而使用UVM肉湯檢測肉類中的李斯特菌。

Half Fraser肉湯是對Fraser肉湯的改良版，它將奈啶酸和鹽酸吖啶黃的含量減半，在ISO的李斯特菌檢測方法中用來作為初步增菌肉湯。

Half Fraser肉湯（不含檸檬酸鐵銨） CM1053：

*可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)需要自行調(diào)整

UVM李斯特菌選擇性增菌培養(yǎng)基  Listeria Selective Enrichment Media (UVM Formulations)

兩步驟、選擇性增菌方法（USDA-FSIS方法）,CM0863B加添加劑SR0142或SR0143，對于肉類中的李斯特菌檢出率高。

UVM 李斯特菌增菌肉湯基礎(chǔ) CM0863：

*可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)需要調(diào)整配方

SR0142E UVM初增肉湯，每小瓶配500ml培養(yǎng)基

SR0143E UVM二次增菌肉湯，每小瓶配500ml培養(yǎng)基

李斯特菌ONE肉湯 (ONE Broth-Listeria)

從食品和環(huán)境樣本中對李斯特菌選擇性增菌。是Oxoid 李斯特菌快速培養(yǎng)檢測方法中的選擇性增菌肉湯。

李斯特菌ONE肉湯可以在24小時內(nèi)對食品樣品中的李斯特菌進(jìn)行增菌，非常適合肉類中檢測李斯特菌。也是 Oxoid Listeria Precis™快速檢測方法中的增菌方法

李斯特菌ONE肉湯基礎(chǔ) CM1066：

SR0234的配方廠家未有公開。

Oxford 李斯特菌選擇性瓊脂 Listeria Selective Agar (Oxford Formulation)

用于檢測李斯特菌的選擇性診斷培養(yǎng)基，經(jīng)過李斯特菌選擇性增菌培養(yǎng)后，使用CM0856加添加劑SR0140或SR0206進(jìn)行再培養(yǎng)：

Oxford 李斯特菌選擇性瓊脂基礎(chǔ) CM0856：

配方表

*可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)需要調(diào)整配方

SR0140E，每小瓶配500ml培養(yǎng)基：

SR0206E，每小瓶配500ml培養(yǎng)基：

PALCAM瓊脂 (PALCAM Agar)

用于檢測李斯特菌屬的選擇性和診斷培養(yǎng)基，CM0877加添加劑SR0150：

PALCAM瓊脂基礎(chǔ) CM0877：

*可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)需要調(diào)整配方

PALCAM選擇性添加劑 SR0150：

使用方法：

每500ml無菌水配34.5g的CM0877干粉，*溶解后121℃滅菌15分鐘，冷卻到50℃，加入已經(jīng)按照說明書溶解的1瓶SR0140E，混勻倒平板。

如果給培養(yǎng)基加入卵黃乳液（比如SR0047），可以使培養(yǎng)基增加受損李斯特菌的恢復(fù)率。

產(chǎn)品描述：

PALCAM培養(yǎng)基由于添加了氯化鋰，頭孢他啶，多粘菌素B，鹽酸吖啶黃，因此具有更高的選擇性， 它通過雙重鑒別指標(biāo)使單增李斯特菌更容易被鑒別和診斷出來。

技術(shù)要點：

1、在增菌肉湯培養(yǎng)的基礎(chǔ)上再轉(zhuǎn)移到瓊脂上培養(yǎng)，將1接種環(huán)的選擇性增菌肉湯接種到PALCAM瓊脂上；

2、在微需氧條件下，37℃培養(yǎng)48小時；

3、48小時候檢查李斯特菌的典型菌落：2mm直徑， 褐綠色菌落，具有黑色凹陷中心，在櫻桃紅色培養(yǎng)基背景下有一圈黑色外環(huán)。

Brilliance李斯特菌顯色瓊脂 (Brilliance Listeria Agar)

選擇性分離和鑒別單增李斯特菌和李斯特屬，作為分離培養(yǎng)基用于Oxoid李斯特菌Precis方法中。使用CM1080加添加劑SR0227E和SR0228E。

使用方法：

稱取33.6g的CM1080到480ml無菌水中，混勻，121℃滅菌15分鐘，冷卻到46℃，分別加入已經(jīng)按照說明書溶解好的SR0227E和SR0228E各1小瓶?；靹?，倒平板。

Brilliance李斯特菌顯色瓊脂基礎(chǔ) CM1080：

配方表：

*可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)需要自行調(diào)整配方

Brilliance李斯特菌顯色選擇性添加劑 SR0227E：

Brilliance李斯特菌顯色鑒別添加劑 SR0228E：

產(chǎn)品描述：

單增李斯特菌是最常見的致病性李斯特菌，而且已經(jīng)表現(xiàn)在對人和動物的致病性上。有一些伊凡諾夫李斯特菌Listeria ivanovii 也有磷脂酶活性， 雖然伊凡諾夫李斯特菌是對動物的主要病原菌，但是也有一些菌株也表現(xiàn)出對人的感染能力。實驗證明這款培養(yǎng)基比PALCAM和Oxford培養(yǎng)基對于分離單增李斯特菌更好。

Brilliance李斯特菌顯色瓊脂中的X-葡萄糖苷顯色劑對李斯特菌屬進(jìn)行初步鑒定，這種顯色劑可由β-葡萄糖苷酶裂解，這種酶在李斯特菌屬里面常見，其他具有這種酶的微生物被培養(yǎng)基中的其他成分抑制，比如腸球菌被氯化鋰，多粘菌素B和奈啶酸抑制，兩性霉素抑制樣品中的霉菌酵母。單增李斯特菌和伊凡諾夫李斯特菌可以產(chǎn)生磷脂酶，可以水解卵磷脂，在菌落外圍產(chǎn)生不透明的白色環(huán)，因此被進(jìn)一步鑒別出來。

質(zhì)控：

陽性對照：Listeria monocytogenes ATCC®7644   生長良好，綠色/藍(lán)色菌落帶有外環(huán)

Listeria innocua ATCC®33090        生長良好，綠色/藍(lán)色菌落沒有外環(huán)

陰性對照：Enterococcus feacalis ATCC®29212   抑制

李斯特菌顯色瓊脂（ISO） Chromogenic Listeria Agar (ISO)

簡稱OCLA瓊脂，用于李斯特菌和單增李斯特菌的選擇性顯色培養(yǎng)基，符合ISO推薦配方（ISO 11290-1:1997 ）

李斯特菌顯色瓊脂基礎(chǔ)（ISO） CM1084：

配方表

*可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)需要自行調(diào)整

OCLA (ISO) SELECTIVE SUPPLEMENT SR0226E：

OCLA (ISO) DIFFERENTIAL SUPPLEMENT SR0244E:

使用方法：

改良ISO配方： 稱取34.5g的CM1084溶解于480ml無菌水中，混勻，121℃滅菌15分鐘，冷卻到46℃，添加按照說明書溶解好的1小瓶SR0226E，再添加1小瓶SR0228E，混勻倒平板。

ISO配方：稱取34.5g的CM1084溶解于480ml無菌水中，混勻，121℃滅菌15分鐘，冷卻到50℃，添加按照說明書溶解好的1小瓶SR0226E，再添加1小瓶SR0244E，混勻倒平板。

技術(shù)要點：

李斯特菌顯色瓊脂（ISO）可以用在多個標(biāo)準(zhǔn)的增菌方法之后，比如ISO，NMKL，F(xiàn)DA，NFNOR(UNI 03/04-04/05)等。

以下方法是對ISO 11290-1:1997 方法的總結(jié)：

1、添加25g食品樣品到225ml的Half Fraser Broth CM0895 & SR0166，混勻至少30秒；

2、將上述培養(yǎng)基在30℃培養(yǎng)24±3小時，不要震蕩培養(yǎng)；

3、使用接種環(huán)接種到李斯特菌顯色瓊脂以及二次選擇性培養(yǎng)基（比如PALCAM CM0877&SR0150）中。37℃培養(yǎng)24±3小時（PALCAM瓊脂應(yīng)該在微需氧條件下培養(yǎng)才能獲得最好結(jié)果）；

4、檢查PALCAM瓊脂上的黑色菌落，或者李斯特菌顯色瓊脂上的沒有外環(huán)的藍(lán)色菌落；

5、將同樣的0.1ml的Half Fraser Broth接種到10ml的Fraser Broth CM0895 & SR0156中，37℃培養(yǎng)48±3小時，然后重復(fù)第3、4步，接下來做第6步；

6、參考ISO 11290-1:1997 使用正確的方法確認(rèn)平板上的可疑菌落為單增李斯特菌或李斯特菌屬。