PRECICE® ADK Assay Kit——novocib

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NOVOCIB位于法國,公司基于核苷酸代謝檢測技術(shù),為生命科學(xué)科研用戶及食品質(zhì)量檢測研究、制藥企業(yè),提供的酶相關(guān)檢測試劑。公司擁有專門用于核苷酸代謝檢測、重組蛋白酶分析及酶檢測試劑研究的PRECICE®檢測分析平臺,實驗試劑及科研服務(wù)涉及分析領(lǐng)域。

人腺苷激酶的高通量測定

PRECICE ^® ADK 檢測試劑盒為 ADK 活性的體外測量和新型 ADK 抑制劑的藥物發(fā)現(xiàn) 提供了一種方便、高通量兼容且非放射性的檢測方法。用于藥物發(fā)現(xiàn)的新工具，該試劑盒允許 HTS 搜索新的 ADK 抑制劑。

原理：
腺苷激酶使用ATP作為磷酸供體。它將 ATP 的末端磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物上，產(chǎn)生 ADP 作為副產(chǎn)物。該測定基于使用肌苷作為替代 ADK 底物和涉及高活性 IMPDH（肌苷一磷酸脫氫酶）的偶聯(lián)反應(yīng)，用于直接測量由 ADK 形成的肌苷一磷酸 (IMP)。在肌苷和ATP存在下，ADK催化肌苷磷酸化形成IMP和ADP。然后在 NAD 存在下，IMP 立即被高活性 IMPDH 氧化為 XMP，從而形成 NADH ₂。

ADK在人體中的作用

腺苷激酶是一種普遍存在的酶，可調(diào)節(jié)腺苷 (AR) 的細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外濃度，腺苷是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的重要調(diào)節(jié)劑，也是參與缺氧、炎癥和傷害感受的信號分子。與腺苷脫氨酶一起，腺苷激酶調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的腺苷濃度。腺苷激酶的抑制導(dǎo)致局部腺苷濃度的選擇性增加和體內(nèi)癲癇發(fā)作易感性和傷害感受的降低⁽³⁾。ADK 功能障礙涉及多種病理，包括糖尿病⁽¹³⁾、癲癇⁽⁶⁾和癌癥。因此，ADK 成為一種合理的治療靶點，腺苷調(diào)節(jié)藥物已被廣泛應(yīng)用。測試⁽¹⁾作為新的鎮(zhèn)痛劑和抗炎劑⁽⁴⁾治療精神分裂癥⁽⁷⁾或限制缺血性中風(fēng)后的腦損傷⁽⁸⁾。

驗證

使用化合物 A-134974（一種已知的 ADK 抑制劑（Sigma-Aldrich，已獲得 Abbott Laboratories 的許可））驗證了使用PRECICE® ADK Screening Assay Kit篩選 ADK 抑制劑和 IC50 測量。Z'-Factor 由 44 個陰性（無 ADK 抑制）和陽性（用 500nM A-134974 抑制 ADK）計算得出，測量結(jié)果為 0.68，這是篩選試驗的出色性能水平

化合物 A-134974 在 12 種不同濃度下的 ADK 抑制曲線。
所有數(shù)據(jù)點代表 8 個孔的平均值 (+/-SD)（2 個孔 - 重復(fù) - 在 4 個獨立的板上）。IC ₅₀通過用最小二乘法擬合數(shù)據(jù)的4參數(shù)非線性曲線來確定。進(jìn)行 IMPDH 活性測定以確認(rèn) IMPDH 不被化合物 A-134974 抑制（數(shù)據(jù)未顯示）。

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