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目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>試劑盒>> 還原型谷胱甘肽(GSH)測試盒

還原型谷胱甘肽(GSH)測試盒
  • 還原型谷胱甘肽(GSH)測試盒
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具體成交價以合同協(xié)議為準
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更新時間:2024-05-08 17:06:05瀏覽次數(shù):437評價

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還原型谷胱甘肽(GSH)測試盒 還原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務。

還原型谷胱甘肽(GSH)測試盒_微量法 100T/96S

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

GSH是細胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì),在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護和氨基酸跨膜運輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標。因此,測定細胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態(tài)。

測定原理:

DTNB與GSH反應生成復合物,在412nm處有特征吸收峰;其吸光度與GSH含量成正比。

自備儀器和用品:

低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。

粗酶液提?。?/p>

  1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。

  2. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

  3. 血清等液體:直接測定。

GSH測定操作:

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調(diào)節(jié)波長到412 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴中保溫30min。

3. 空白管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL蒸餾水,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。

4. 測定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。

注意:空白管只需要測定一次。

GSH含量計算公式:

GSH標準曲線公式:y=1.5 x(x為GSH濃度,μ mol /mL;y為吸光值)

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

(1)按蛋白濃度計算

GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣×Cpr) =0.667×(A2-A1) ÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計算

GSH(μ mol/g 鮮重)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2-A1) ÷W

(3)按細胞數(shù)量計算

GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)=0.667×(A2-A1) ÷細胞數(shù)量

(4)按液體體積計算

GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2-A1)

V反總:反應總體積,0.2mL;V樣總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量

b.使用96孔板測定的計算公式如下

GSH標準曲線公式:y=0.75x(x為GSH濃度,μ mol /mL;y為吸光值)

(1)按蛋白濃度計算

GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷0.75×V樣÷V樣÷Cpr =1.334×(A2-A1) ÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

GSH(μ mol/g 鮮重)=(A2-A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=1.334×(A2-A1) ÷W

(3)按細胞數(shù)量計算

GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)=1.334×(A2-A1) ÷細胞數(shù)量

(4)按液體體積計算

GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷0.75×V反總÷V樣 =1.334×(A2-A1)

V樣總:上清液總體積,1mL;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。

注意事項:

  1. 試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。

  2. *低檢出限為0.011mmol/L。

上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

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  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。

還原型谷胱甘肽(GSH)測試盒


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