您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)
會(huì)員.png)
7
關(guān)于微生物菌種的冷凍干燥保藏轉(zhuǎn)接技術(shù)
冷凍干燥保藏轉(zhuǎn)接技術(shù)：
建議用下列方法恢復(fù)培養(yǎng)冷凍干燥保藏的菌種。
1、安瓶管開(kāi)封
用浸過(guò)70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。
用火焰將安瓿管頂端加熱。
滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開(kāi)裂。
用挫刀或鑷子敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)
用無(wú)菌吸管，吸取0.3-0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴人安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。
取0.1-0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面/平板培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi)，然后在建議的溫度下培養(yǎng)。
3、注意事項(xiàng)
菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6一10℃的環(huán)境下。
厭氧菌的培養(yǎng)，如無(wú)特別說(shuō)明，自開(kāi)封至接種完成，均需以無(wú)氧氣體充填，以保持厭氧狀態(tài)。
某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)，此時(shí)請(qǐng)將步驟二重復(fù)一次。
轉(zhuǎn)接方法：
真菌轉(zhuǎn)接需使用的接種工具為接種鉤、鏟，其樣式大小。制造的金屬可用鉑絲或鎳絲，也可使用電爐絲，原則是軟硬度適當(dāng)，能經(jīng)受反復(fù)火焰燒紅。接種真菌的接種鉤、鏟，其絲的直徑以1毫米比較適合。步驟：右手執(zhí)針（鏟、鉤等），左手執(zhí)管，燒針滅菌，拔塞燒口，挑菌移植，燒口塞管，燒針滅菌等。
右手執(zhí)接種鉤、鏟，使前端細(xì)絲的部位全部在火焰上燒紅殺菌，左手執(zhí)斜面試管，試管口在拔塞前快速通過(guò)火焰，不要使試管口過(guò)熱；
接種鉤、鏟前端細(xì)絲的部位全部燒紅后插入70%無(wú)菌酒精里，拿出再燒紅，空氣中自然冷卻或放入70%無(wú)菌酒精瓶?jī)?nèi)冷卻，再將接種鉤、鏟前端細(xì)絲的部位快速通過(guò)火焰除去酒精；
用接種接種鉤、鏟挑取菌塊移植到新的斜面培養(yǎng)基上（斜面試管管口滅菌）后；
試管口和塞子快速通過(guò)火焰滅菌，不要使試管口過(guò)熱或使棉塞著火；
斜面試管口塞緊硅膠塞或棉塞，將接種鉤、鏟接觸真菌的部位燒紅后放入70%無(wú)菌酒精瓶中；
接種后的試管放25℃（無(wú)特殊溫度要求的真菌）培養(yǎng)箱培養(yǎng)。