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細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進(jìn)行保種并長(zhǎng)期保存的常用方法，其中細(xì)胞凍存液，作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液，不僅僅是說(shuō)只是用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的保存，在細(xì)胞的購(gòu)買(mǎi)、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送過(guò)程中也起著關(guān)鍵作用，因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。

細(xì)胞凍存要取得好的效果，多采用血清、甘油或二甲基亞砜(DMSO)等作為保護(hù)劑，最大限度的保存細(xì)胞活力。這些物質(zhì)有些能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，在緩慢冷凍過(guò)程中可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。同時(shí)，有些保護(hù)劑在細(xì)胞外也能減輕溶液中高濃度溶質(zhì)對(duì)細(xì)胞的損傷，進(jìn)一步避免細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過(guò)程中受到損傷。滲透性保護(hù)劑DMSO和非滲透性保護(hù)劑血清（主要含白蛋白）是使用最為廣泛，效果最為穩(wěn)定可靠的。

此外，采用“慢凍快融”的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開(kāi)始為-1到-2℃/分鐘，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。復(fù)蘇細(xì)胞采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。

現(xiàn)有凍存方法存在的問(wèn)題：
1、DMSO對(duì)細(xì)胞存在一定的毒性，用量受到限制，降低或者不使用DMSO，尋找其它替代物是比較好選擇。
2、血清，即使是純化得到的白蛋白，由于其動(dòng)物來(lái)源的特性，會(huì)極大增加帶來(lái)病毒等感染物質(zhì)的可能。而且，血清來(lái)源受限，價(jià)格昂貴，所以其使用也必然會(huì)受到越來(lái)越多的限制。因此，尋找替代血清的非滲透性保護(hù)劑也顯得尤為必要。
3、目前，成熟和穩(wěn)定的凍存細(xì)胞技術(shù)是將加有保護(hù)劑的細(xì)胞懸液置于-196℃液氮中，這樣可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而保持細(xì)胞的特性，在需要的時(shí)候經(jīng)過(guò)復(fù)蘇程序，使得細(xì)胞重新生長(zhǎng)增殖以用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞儲(chǔ)存在-196℃液氮中，理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無(wú)限的，但是液氮凍存步驟繁瑣，需要經(jīng)過(guò)程序降溫，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)(或隔夜)，最后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過(guò)1個(gè)小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量的死亡。)

賽爾瑞成科學(xué)家團(tuán)隊(duì)在細(xì)胞凍存領(lǐng)域進(jìn)行了大量研究工作，分別于2015年研發(fā)了 “Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0101） 和2020年研發(fā)了 “無(wú)血清低DMSO細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0201；申請(qǐng)?zhí)枺?02010307890.6）。這兩款凍存液均是不含血清，含DMSO，非程序降溫、可-80℃長(zhǎng)期冷凍保存的通用型細(xì)胞凍存液 ，區(qū)別在于“Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液”(貨號(hào)：CF0101)的DMSO含量為10%， “無(wú)血清低DMSO細(xì)胞凍存液”(貨號(hào)：CF0201)DMSO的含量為5%(與傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液的對(duì)比可參考附表) ，產(chǎn)品均獲得了廣大科研工作者的喜愛(ài)。

“Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0101）鏈接

“無(wú)血清低DMSO細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0201）鏈接

鑒于某些類(lèi)型的細(xì)胞對(duì)DMSO敏感，使用含DMSO的細(xì)胞凍存液可能會(huì)影響細(xì)胞的功能，賽爾瑞成繼續(xù)研究工作，開(kāi)發(fā)出一款無(wú)血清、無(wú)DMSO、無(wú)毒性、非程序降溫、-80℃可長(zhǎng)期冷凍保存的凍存液體系：CRD0無(wú)血清無(wú)DMSO細(xì)胞凍存液（貨號(hào)：CF0301）。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

☆  高安全性，不含血清及動(dòng)物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。

☆  無(wú)DMSO，對(duì)細(xì)胞無(wú)潛在的毒性作用。

☆   細(xì)胞存活率高，無(wú)批次差異。

☆  *凍存液配方，可直接使用，方便簡(jiǎn)捷。

☆  可直接存放于-80℃冰箱凍存，無(wú)需經(jīng)過(guò)費(fèi)時(shí)的程序降溫過(guò)程(省時(shí)、省力、省錢(qián))，不需要采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮。

☆  可原位凍存，比如雜交瘤細(xì)胞的亞克隆，可以大規(guī)模減少工作量，避免污染。

CRD0無(wú)血清無(wú)DMSO細(xì)胞凍存液凍存效果：
 

圖1. 3T3細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖                                

           3T3細(xì)胞存活率>90%   

圖2. ATDC5細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖

          ATDC5存活率>90%

圖3 小鼠脾臟T細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞凋亡圖   

 三個(gè)批次復(fù)蘇率均>95%，且批次間凍存效果無(wú)明顯差異

附表：通用細(xì)胞凍存液，CRD10無(wú)血清細(xì)胞凍存液、CRD5無(wú)血清低DMSO細(xì)胞凍存液，CRD0無(wú)血清無(wú)DMSO細(xì)胞凍存液的比較