化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常問題分析
閱讀：38 發(fā)布時(shí)間：2025-4-28ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)異常剖析：
一、白板異常：顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對(duì)照不顯色。
1. 試劑已過效期，或不同試劑盒組分混用；
解決方式：檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)未過期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用。
2. 錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B；
解決方式：嚴(yán)格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現(xiàn)象。
3. 洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力；
解決方式：確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈。
4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜锞彌_液配制；
解決方式：每次配制時(shí)都應(yīng)看清標(biāo)簽標(biāo)明物質(zhì)。
5. 蒸餾水有問題；
解決方式：確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未污染，與好蒸餾水比較。
6. 顯色弱、靈敏度低。
解決方式：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，包括陽性對(duì)照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。
二、陰陽性對(duì)照正常，但質(zhì)控、參考品或個(gè)別弱陽性標(biāo)本未能檢出。
1. 未達(dá)要求的孵育溫度及孵育時(shí)間可檢出強(qiáng)陽性標(biāo)本，但質(zhì)控或弱陽性標(biāo)本受 溫度變化影響較大而被未檢出。
解決方式：質(zhì)控品或標(biāo)本避免反復(fù)凍融。標(biāo)本在一周內(nèi)使用的，可存于 2-8℃，如需長期保存，應(yīng)置于-20℃以下保存。質(zhì)控品應(yīng)小量分裝，并置于-20℃以下保存。
2. 質(zhì)控品或標(biāo)本高溫放置過久，或被反復(fù)凍融致待測(cè)物滴度下降，而未能檢出。
解決方式：重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配。
3. 儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配。
解決方式：重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配。
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，陰陽性對(duì)照正常，質(zhì)控正常，但標(biāo)本感覺顯色較弱。
1. 待測(cè)標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽性標(biāo)本，故結(jié)果可能是正常的。
解決方式：如有懷疑，可復(fù)檢。
2. 標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑。
解決方式：酶免實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑。