詳細介紹
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞;PK136培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 雜交瘤細胞系PK136分泌一種小鼠單克隆抗體(IgG2a),此抗體與小鼠NK細胞起反應(yīng)。 該細胞系由SP2/0-Ag14骨髓瘤和用CE小鼠脾細胞和骨髓細胞免疫的(C3H X BALB/C)F1小鼠的脾細胞融合而成。 此抗體對NK特異且在有補體時有細胞毒作用。 此抗體與不同小鼠株的細胞的反應(yīng)方式,與常規(guī)的NK1.1抗血清的反應(yīng)方式相符。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10% FBS
傳代方法 1:
2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 P
小鼠雜交瘤細胞;PK136培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
小鼠雜交瘤細胞;PK136培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
小鼠雜交瘤細胞;PK136培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-phospho-STAT1(pThr701)/FITC 熒光素標記抗磷酸化信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-human IgM 小鼠抗人IgM (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
G蛋白偶聯(lián)受體-2抗體 Anti-GASR 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/Bio 生物素標記的驢抗兔IgG 0.1ml
FKBP25 英文名稱: 肽基脯酸異構(gòu)酶酶FKBP25抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-SMC1 (Ser360) 磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)1抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Anti-human IgM 小鼠抗人IgM (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
PP ELISA Kit 大鼠胃蛋白酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Transferrin 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GIMAP8 GTP酶IMAP家族成員8抗體 規(guī)格 0.2ml
Orexin A(Human Orexin A) ELISA Kit 人阿立新A 96T
Nuclear Pore Complex Proteins 英文名稱: 核孔復(fù)合體蛋白抗體 0.2ml
Alpha-Synuclein 英文名稱: 核突觸蛋白抗體 0.1ml
Anti-Transferrin 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Synapsin II 英文名稱: 神經(jīng)突觸素2抗體 0.2ml
ESYT1 英文名稱: 延伸突觸蛋白1抗體 0.2ml
軸索過度生長抑制因子-B抗體 Anti-Nogo-B 0.2ml
Anti-Phospho-SirT1 (Ser47) /FITC 熒光素標記磷酸化沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-P53(Thr18) 磷酸化抑制基因P53抗體 規(guī)格 0.1ml
Bax peptide Bax(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠雜交瘤細胞;PK136培養(yǎng)FA(Mouse Folic acid) ELISA Kit 小鼠葉酸Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CDK6/FITC 熒光素標記周期素依賴性激酶6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
BLC-1/CXCL13(Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1,BLC-1) ELISA Kit 人B-淋巴細胞趨化因子 96T
Manic Fringe 英文名稱: 狂躁基因同源蛋白MFNG抗體 0.2ml
Phospho-Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha (Ser78) 英文名稱: 磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體 0.1ml
Anti-CDK6/FITC 熒光素標記周期素依賴性激酶6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml