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詳細(xì)介紹
人角膜上皮原代細(xì)胞
人角膜上皮細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。其主要功能如下：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能，分三層細(xì)胞層，外層即是上皮細(xì)胞；②角膜上皮細(xì)胞能參與先天性免疫，能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號從而激活角膜防御系統(tǒng)；③角膜上皮細(xì)胞能高效表達(dá)醛脫氫酶。角膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)對研究角膜的生理學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重要的手段，常用于研究細(xì)胞代謝產(chǎn)物、病毒感染、各種生長因子和藥物對細(xì)胞生長的影響。
英文名稱 | Human Corneal Epithelial cells | 組織來源 | 眼角膜組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7406 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人角膜上皮細(xì)胞
組織來源：眼角膜組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
原代滑膜皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml | Bid ELISA Kit 大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1orf172： 1號染色體開放閱讀框172抗體 0.2ml | GIRK2： G蛋白激活內(nèi)流通道蛋白2抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CEP97 中心體蛋白97kDa抗體 規(guī)格 0.2ml | PCDHAC1： 原鈣粘蛋白1抗體 0.2ml |
Anti-Nm23-H1/FITC 熒光素標(biāo)記抑制基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | GITR (glucocorticoidinduced tumor necrosis factor receptor) 糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)壞死因子受體抗原 0.5mg |
IgG/FITC 熒光素標(biāo)記驢抗人IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml | MAS1： GTP結(jié)合蛋白MAS1抗體 0.1ml |
MAP2K2 Others Human 人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 人永生化淋巴細(xì)胞;CNLMG-B5537LC 人肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人腦血管周細(xì)胞HBVP | CD82 Others Human 人 CD82 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CCL-149(大鼠肺泡上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0086GNM(人口腔鱗癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠Lewis肺癌瘤株;LLT | IL12B Others Mouse 小鼠 IL12B / IL-12B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
PCSK9 Others Rat 大鼠 PCSK9 / NARC1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 大額牛腎細(xì)胞;BFR-K1 骨髓瘤細(xì)胞，SP2/0細(xì)胞 DU145(前列腺癌細(xì)胞) |
斑馬魚尾鰭細(xì)胞;AB.9 | 人角膜上皮原代細(xì)胞PCDHAC1： 原鈣粘蛋白1抗體 0.2ml |
97H-CMV-EGFP-puro(慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人肝癌細(xì)胞 97H-CMV-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) of human hepatocellular carcinoma cells DMEM+10% FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin | 人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;Jurkat, Clone E6-1 |
CHL-Don 中國倉鼠肺成纖維樣細(xì)胞 | AGA Others Human 人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Anti-IL-4/FITC 熒光素標(biāo)記白介素4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-RGS5 G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子5抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 615小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤瘤株;DCS 小鼠軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Rhesus antibody Rh Phospho-HER4 (Tyr1188) 0酸化HER4抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHL25 Kelch樣蛋白25抗體 規(guī)格 0.2ml |
HBcAb(立可讀) 乙型肝炎核心抗體 96T | MAP2K2 Others Human 人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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