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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜基質(zhì)采用膠原酶消化后組織貼塊法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜基質(zhì)經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人角膜基質(zhì)原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 眼角膜組織 |
英文名稱(chēng) | Human Corneal Stromal Cells | 貨號(hào) | YS-01X7572 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人角膜基質(zhì)細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒(méi)有血管，透過(guò)外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。角膜基質(zhì)層是角膜的主要組成部分，占據(jù)角膜厚度的90%，由角膜基質(zhì)細(xì)胞、膠原纖維和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成。角膜基質(zhì)層缺損的修復(fù)主要由角膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖及分泌細(xì)胞外基質(zhì)完成。角膜基質(zhì)層具有結(jié)構(gòu)規(guī)整，透明度高的特點(diǎn)，正常情況下角膜基質(zhì)細(xì)胞分泌組成基質(zhì)層的成分，維持角膜的透明度，此細(xì)胞對(duì)于角膜損傷的修復(fù)具有重要意義。角膜基質(zhì)細(xì)胞，存在于角膜基質(zhì)層中，在正常情況下，處于靜止?fàn)顟B(tài)。但當(dāng)角膜損傷時(shí)，不同上皮來(lái)源的因子及環(huán)境信號(hào)，將影響角膜基質(zhì)細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)，決定著角膜能否被修復(fù)。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)無(wú)血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml | Anti-Trop-2 原肌球蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
P-PKC(Human phospho Protein Kinase C) ELISA Kit 人0酸化蛋白激酶C 96T | Anti-Phospho-MKK7 (Ser271/Thr275) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化原活化蛋白激酶MKK7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TLK2 絲/蘇激酶TLK2抗體 規(guī)格 0.2ml | M2-PK (Human Pyruvate Kinase) ELISA Kit 人酸激酶M2型同工酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
H3-K4-HMTase SETD7： 組蛋白H4-K4甲基轉(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh CCDC12 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-FADD (Ser194)： 0酸化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗體 0.1ml | BTC ELISA Kit 大鼠β細(xì)胞素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
AMY2A Others Cynomolgus 食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CHL1 Others Human 人 CHL1 / CALL 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人腦血管周細(xì)胞RNAHBVP miRNA5 μg | PLA2G12B Others Mouse 小鼠 PLA2G12B / PLA2G13 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
MADB106(大鼠癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 CD2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CNPY2 Others Human 人 CNPY2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
E.G7-OVA(小鼠T淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人卵巢成纖維細(xì)胞HOF | JAG1 Others Human 人 JAG1 / JAGL1 / CD339 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL1 | 人角膜基質(zhì)原代細(xì)胞M2-PK (Human Pyruvate Kinase) ELISA Kit 人酸激酶M2型同工酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
人尿道上皮細(xì)胞(HUC)(5×105) 人羊膜上皮細(xì)胞 Human | CM-R002大鼠肺血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系 | 293001B細(xì)胞，Sars蛋白表達(dá)株 人導(dǎo)管癌細(xì)胞,MDA-MB-453細(xì)胞 口腔角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基OKM-prf |
TWSG1 Others Mouse 小鼠 TWSG1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Anti-Proteasome 20S LMP2 /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠低分子質(zhì)量蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OSMR： 抑瘤素M受體抗體 0.1ml | EFNA5 Others Mouse 小鼠 EFNA5 / Ephrin-A5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
SPO11： 減數(shù)分裂重組蛋白SPO11抗體 0.2ml | C2orf6： 2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框6抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格 0.1ml | AMY2A Others Cynomolgus 食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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