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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人腸微血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人腸微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人腸微血管內(nèi)皮原代細胞 | 組織來源 | 腸組織 |
英文名稱 | Human Intestinal Microvascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7133 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人腸微血管內(nèi)皮細胞分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經(jīng)門排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng)。微血管是極細微的血管，管徑平均為6-9μm，連于動、靜脈之間，互相連接成網(wǎng)狀。微血管壁薄，管徑較小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液與組織之間進行物質(zhì)交換。其管壁主要由一層內(nèi)皮細胞構成，在內(nèi)皮外面有一薄層結締組織。另外還?？梢姷揭环N扁而有突起的細胞貼在微血管的管壁外面，稱為周細胞。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
293XL-hTLR9人胚腎細胞 Human embryonic kidney cell line 293XL-hTLR9 DMEM+10% Hyclone 滅活血清+10 μg/ml Blasticidin | CNP(Human C -type natriuretic peptide) ELISA Kit 人C型尿肽 96T |
RAP1GDS1： G蛋白GTP-GDP解離刺激因子1抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml |
Anti-HA tag/HRP 辣根過氧化物酶標記HA tag標簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CROT： 過氧化物酶體肉堿?；D(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BTBD10 BTB/POZ結構域蛋白10抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Cripto-1/FITC 熒光素標記表皮生長因子相關肽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體 Anti-E2F2 0.1ml | ALDH1B1： 乙醛脫氫酶5抗體 0.1ml |
BMP2 Protein Human 重組人 BMP-2 / BMP2A 蛋白 | 人膀胱平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL |
Hepa 1-6細胞，小鼠肝癌細胞 PC-12(腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞) EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0923 | CCL8 Protein Human 重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標簽) |
人十二脂腸腺癌;HuTu-80 | U-2 OS, 人骨肉瘤細胞 Human |
C918 人眼脈絡黑色素瘤細胞 | CL-0031BEL-7402(人肝癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞(B類);Pan02-CAG-tTA-4C5 (含100mL酶解緩沖液) 10mL | 人腸微血管內(nèi)皮原代細胞CROT： 過氧化物酶體肉堿酰基轉(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml |
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-2H3 | 雜交瘤(B類);Z1510C6D10F4G6 小鼠脈絡膜血管細胞培養(yǎng)基 100mL |
人喉癌上皮細胞;Hep-2 大鼠食管平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL | IL13 Protein Mouse 重組小鼠 IL13 / ALRH 蛋白 |
人肺大靜脈平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL | IgG/Cy7 Cy7標記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh H1N1 Hemagglutinin 1/HA probe 甲型流感病毒血凝素抗體 規(guī)格 0.2ml | 人臍靜脈內(nèi)皮細胞;HUV-EC-C |
Phospho-EGFR(Tyr845)： 0酸化表皮生長因子受體抗體 0.1ml | Anti-LIS1 無腦回的致病基因LIS1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Cyclin-D3(Mouse Cyclin-D3) ELISA Kit 小鼠細胞周期素D3Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | BMP2 Protein Human 重組人 BMP-2 / BMP2A 蛋白 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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