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詳細(xì)介紹
人表皮成纖維原代細(xì)胞
人表皮成纖維細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
英文名稱 | 見說明 | 組織來源 | 皮膚組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7554 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人表皮成纖維細(xì)胞
組織來源：皮膚組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人表皮成纖維采用先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人表皮成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
MN-h, 小鼠海馬元 人肝上皮細(xì)胞，THLE-3細(xì)胞 EL4(淋巴瘤細(xì)胞) | OLAb ELISA Kit 大鼠氧化低密度脂蛋白抗體 96T |
Rab3A+Rab3B+Rab3C+Rab3D： ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh AP 堿性0酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml |
Anti-HA tag/FITC 熒光素標(biāo)記HA tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C16orf7： 16號染色體開放閱讀框7抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BTBD17 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CRHR2/CRFR2/FITC 熒光素標(biāo)記促腎上腺皮質(zhì)釋放激素受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體 Anti-E2F1 0.1ml | ALF： 通用轉(zhuǎn)錄因子IIA樣因子抗體 0.1ml |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29 | CL-0335EB (NBL-4) (牛胚氣管細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
45.6.TG1.7細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞 人T細(xì)胞白血病細(xì)胞,HuT 78細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0901 | 293(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
大鼠胰腺星狀細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽) |
原代骨骼肌細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml | CL-0028AtT-20(小鼠垂體瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
MA104非洲綠猴胚胎腎上皮細(xì)胞 MA104 Africa green monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS | 人表皮成纖維原代細(xì)胞C16orf7： 16號染色體開放閱讀框7抗體 0.2ml |
大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1 | 小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1 小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
MuM-2C(人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 氣管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | MS751(人子宮頸表皮癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
胃癌組織源性原代成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml | IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.3ml |
Rhesus antibody Rh H1N1 Hemagglutinin 1/Influenza A bp1 甲型流感病毒血凝素抗體 規(guī)格 0.2ml | 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C |
EXOSC3： 核糖體RNA合成蛋白40抗體 0.2ml | Anti-LIR-8/CD85c/LILRB5 白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體8抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
IL-8/CXCL8(Mouse interleukin 8) ELISA Kit 小鼠白介素8Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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