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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人鼻黏膜成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人鼻黏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人鼻黏膜成纖維原代細(xì)胞 | 組織來源 | 鼻粘膜組織 |
英文名稱 | Human Nasal Mucosal Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7657 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人鼻黏膜成纖維細(xì)胞分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在人體內(nèi)消化、呼吸、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu)，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜、胃腸黏膜、鼻腔黏膜、氣管黏膜、陰道黏膜、眼瞼黏膜等不同名稱。它們的結(jié)構(gòu)也因功能、部位不一而不盡相同。鼻腔黏膜，簡(jiǎn)稱鼻黏膜，覆蓋于鼻腔表面，黏膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
PA317細(xì)胞，逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝用的人胚胎成纖維細(xì)胞 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 豚鼠肺細(xì)胞;GP-F1 | Rhesus antibody Rh GIMAP7 GTP酶IMAP家族成員7抗體 規(guī)格 0.2ml |
PHC(Human primary hepatic carcinoma) ELISA Kit 人肝癌抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | APC APC標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml |
IL-6： 白介素6抗體 0.1ml | CCP(Human anti-cyclic citrullinated peptide) ELISA Kit 人抗環(huán)胍酸肽抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RIT1 RIT1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Kv3.3/Kcnc3/FITC 熒光素標(biāo)記離子通道蛋白Kv3.3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-TNIK(Ser764) 0酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | IL-1(Human Interleukin 1) ELISA Kit 人白介素1 96T |
CCL17 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL17 / TARC 蛋白 (His 標(biāo)簽) | HCCC-9810 人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞 |
293 Cells, low passage人胚腎細(xì)胞 293 Cells, low and passage in human embryo kidney cell 人胚腎細(xì)胞 | LTA Protein Human 重組人 TNF-beta / TNFSF1 / Lymphotoxin alpha 蛋白 |
人胚胎，皮膚，肌肉;M-7 | T24, 人膀胱癌細(xì)胞 Human |
人淋巴成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | /EDTA消化液T/E |
大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞;RIN-m5F 原位胰腺腺癌細(xì)胞，BxPC-3細(xì)胞 MM45T.Li細(xì)胞，鼠肝癌細(xì)胞系 | 人鼻黏膜成纖維原代細(xì)胞CCP(Human anti-cyclic citrullinated peptide) ELISA Kit 人抗環(huán)胍酸肽抗體 96T |
T-101A酶(含10mL 酶解緩沖液)1mL | SPARC Others Mouse 小鼠 SPARC / BM-40 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
EDA2R Others Cynomolgus 食蟹猴 XEDAR / EDA2R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CM-H016人呼吸道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞;RAMOS | Rhesus antibody Rh APR3/C2orf28 凋亡相關(guān)蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml |
Bcl 2 like protein 9： Bcl2樣凋亡蛋白9抗體 0.2ml | CL-0349Hela 299(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
Anti-SRF/FITC 熒光素標(biāo)記血清應(yīng)答因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Patched： Patched/PTCH抗體 0.1ml |
Anti-IL-7Ra/CD127/PE 熒光素PE標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、馬、兔白細(xì)胞介素-7受體a抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CCL17 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL17 / TARC 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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