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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的雞主動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的雞主動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 雞主動脈平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來源 | 主動脈 |
英文名稱 | Chicken Aortic Smooth Muscle Cells | 貨號 | YS-01X8286 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
雞主動脈平滑肌細(xì)胞分離自主動脈組織；主動脈是體循環(huán)的動脈主干。其運行路徑為：升主動脈起于左心室，至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動脈弓，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動脈；在第12胸椎體高度穿膈的主動脈裂孔移行為腹主動脈，以上為胸主動脈，至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動脈；髂總動脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動脈。主動脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。主動脈平滑肌細(xì)胞在心血管疾病發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，以主動脈平滑肌細(xì)胞為實驗研究對象，探討心血管疾病相關(guān)發(fā)病機(jī)制是目前研究的熱點；體外培養(yǎng)的主動脈平滑肌細(xì)胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
雞主動脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
獼猴皮膚細(xì)胞;MMS7 人淋巴胚胎性癌細(xì)胞，Cates-1B細(xì)胞 MDA-MB-453(癌細(xì)胞) | Orexin A(Human Orexin A) ELISA Kit 人阿立新A 96T |
RASGEF1A： 核苷酸交換因子rasgef1a抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh APC APC標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml |
Anti-HA tag/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記HA tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C16orf57： 16號染色體開放閱讀框57抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BTBD19 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白19抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CRHR1/CRFR1/FITC 熒光素標(biāo)記促腎上腺皮質(zhì)釋放激素受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
兔抗人鳥苷三0酸酶-發(fā)動蛋白2抗體 Anti-Dynamin 2 0.1ml | ATG4D： 自噬相關(guān)蛋白4D抗體 0.2ml |
黑人Butt淋巴瘤細(xì)胞;RAJI | 人腎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
P19細(xì)胞，小鼠畸胎瘤細(xì)胞 MCF7(癌細(xì)胞) 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204 | CCL5 Protein Human 重組人 CCL5 / RAES 蛋白 (His & mucin 標(biāo)簽) |
雙位點HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7 | Raw264.7, 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 Mouse |
小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | CL-0026ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1) 膠質(zhì)瘤細(xì)胞，SHG-44細(xì)胞 W6/32細(xì)胞，小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 | 雞主動脈平滑肌原代細(xì)胞C16orf57： 16號染色體開放閱讀框57抗體 0.2ml |
大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1 | 人細(xì)胞;Hela P10s-11F 大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Promocell C-27417 Preadipocyte Growth Medium KIT, 前脂肪細(xì)胞生長培養(yǎng)基套裝 500ml | NCI-H1688(人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IgG/FITC FITC標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.3ml |
Rhesus antibody Rh H1N1 Hemagglutinin 2 甲型流感病毒血凝素抗體 規(guī)格 0.1ml | 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC |
ENTPD2： CD39樣蛋白1抗體 0.2ml | Anti-LIR-6 白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體6抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
A Beta1-40(Mouse amyloid beta peptide 1-40) ELISA Kit 小鼠β淀粉樣蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 黑人Butt淋巴瘤細(xì)胞;RAJI |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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