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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞氣管上皮采用蛋白酶-連酶蛋白酶混合消化法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞氣管上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 雞氣管上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 氣管組織 |
英文名稱 | Chicken Tracheal Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7044 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
雞氣管上皮細(xì)胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動(dòng)將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | Anti-TREML2/TLT2 髓系細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
AST(Human Aspartate aminotransferase) ELISA Kit 人天門冬酸基轉(zhuǎn)移酶 96T | Anti-MIP-3 Beta/ELC/CCL19/FITC 熒光素標(biāo)記巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β 抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TM4SF3 跨膜蛋白4超家族成員3抗體 規(guī)格 0.2ml | ADAM8(Human A Disintegrin And Metalloprotease 8) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶8Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
Heparan Sulfate Proteoglycan 2： 乙酰肝素蛋白多糖2 0.1ml | Rhesus antibody Rh CCDC146 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白146抗體 規(guī)格 0.2ml |
FBXL21： FBXL21蛋白抗體 0.1ml | bFGF-4 ELISA Kit 大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
RPS6KA2 Others Human 人 RSK3 / RPS6KA2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 大鼠顆粒細(xì)胞(RGC)(1×106) U-2 OS, 人骨肉瘤細(xì)胞 Human |
人胚肺二倍體細(xì)胞;2BS | IGSF8 Others Mouse 小鼠 PGRL / IGSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CA4 Others Human 人 CA4 / Car4 / CAIV 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | LAIR2 Others Human 人 LAIR2 / CD306 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HAVCR1 Others Mouse 小鼠 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | SERPINA1 Others Human 人 SerpinA1 / A1AT 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
大額牛肺細(xì)胞;BFR-L1 | 雞氣管上皮原代細(xì)胞ADAM8(Human A Disintegrin And Metalloprotease 8) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶8Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
VCAM1 Others Mouse 小鼠 VCAM1 / L1CAM / CD106 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 兔腎細(xì)胞;RK13 |
中國倉鼠肺細(xì)胞;V79 | D341 Med細(xì)胞，人髓母細(xì)胞瘤 人癌細(xì)胞,BCaP-37細(xì)胞 心肌細(xì)胞培養(yǎng)基CMM-prf |
二：大鼠正常細(xì)胞 | Anti-Rb/RB1 protein/FITC 熒光素標(biāo)記視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OLIG1： 少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子1 0.2ml | 人正常肺上皮細(xì)胞;BEAS-2B 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
SREBP-1： 調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml | DENTT： 細(xì)胞分裂核仁蛋白1抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml | RPS6KA2 Others Human 人 RSK3 / RPS6KA2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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