大鼠眼動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 Beta-TC-6(小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞) IM-9 人外周血B淋巴細(xì)胞 1ml/T75 P19 小鼠畸胎瘤細(xì)胞 RAMSCs 大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 人原代骨髓樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：

方法簡介

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠眼動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠眼動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡介：

大鼠眼動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼動(dòng)脈組織，眼動(dòng)脈是眼眶及內(nèi)容物主要的血液供應(yīng)，是頸內(nèi)動(dòng)脈主要分枝，也是交通顱內(nèi)外血管的重要通道。有研究結(jié)果認(rèn)為，絕大多數(shù)眼動(dòng)脈起源于ICA剛出海綿竇處，且多數(shù)起源于ICA床突上段內(nèi)上壁，少數(shù)起源于上壁，少數(shù)眼動(dòng)脈可起源于ICA海綿竇段及腦膜中動(dòng)脈。眼動(dòng)脈的走行分為顱內(nèi)段、管內(nèi)段及眶內(nèi)段，眼動(dòng)脈在管內(nèi)段一般行走于視上方，顱內(nèi)段和眶內(nèi)段再分為五段：1、短臂；2、A角；3、長臂；4、B角；5、遠(yuǎn)側(cè)部。眼動(dòng)脈進(jìn)入眶內(nèi)后沿視向下外側(cè)走行，終止于眶孔的上內(nèi)側(cè)角。眼動(dòng)脈的分枝一般分為眼組、眶組及眶外組。眼組分為視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈睫前動(dòng)脈及眼球的脈絡(luò)叢；眶組分為淚腺動(dòng)脈和肌動(dòng)脈；眶外組分為篩后動(dòng)脈、篩前動(dòng)脈、眶上動(dòng)脈、瞼內(nèi)側(cè)動(dòng)脈、鼻背動(dòng)脈(終末枝)。眼動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋在眼動(dòng)脈內(nèi)面的單層細(xì)胞，可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài)，當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些血管疾病的發(fā)生。因此，眼動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞已成為研究眼部血管疾病發(fā)病機(jī)制及治療藥物的工具。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細(xì)胞，由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至小的微血管。眼動(dòng)脈供應(yīng)整個(gè)眼球、眼球附屬器及部分附近組織的營養(yǎng)。眼動(dòng)脈可發(fā)生痙攣、血栓、栓塞及出血等，均可嚴(yán)重影響視力。頸內(nèi)動(dòng)脈眼動(dòng)脈瘤簡稱眼動(dòng)脈瘤，又稱床突旁動(dòng)脈瘤或頸內(nèi)動(dòng)脈腹側(cè)動(dòng)脈瘤。眼動(dòng)脈瘤是位于眼動(dòng)脈和后交通動(dòng)脈之間的動(dòng)脈瘤，占全部顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的0.47%～9.26%，30%～70%患者表現(xiàn)為SAH，1/3有視功能損傷，如視力減退、視野缺損和視等。體外培養(yǎng)的眼動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠眼動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

公司產(chǎn)品：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。