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原代細(xì)胞功能檢測(cè)方法
閱讀：673 發(fā)布時(shí)間：2018-5-22為了檢測(cè)原代細(xì)胞機(jī)體的免疫功能，可以通過(guò)體外或體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)參與免疫應(yīng)答的不同細(xì)胞進(jìn)行分離、鑒定及功能測(cè)定。用于上述免疫功能檢測(cè)的材料zui常用的是外周血，也可以是胸腺、脾、淋巴結(jié)及各種組織。
一、免疫細(xì)胞的分離
體外測(cè)定免疫細(xì)胞的功能，首先要從不同材料中分離所需細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞的表面標(biāo)志、理化性質(zhì)及功能進(jìn)行設(shè)計(jì)和選擇不同的分離方法。
（一）外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離
外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMC）包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。PBMC是免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)zui常用的細(xì)胞，也是進(jìn)行T、B細(xì)胞分離純化過(guò)程的*步。常用的分離方法是葡聚糖-泛影葡胺（Ficoll-Urografin）密度梯度離心法。
（二）淋巴細(xì)胞及其亞群的分離
淋巴細(xì)胞及其亞群的分離有多種方法，如玻璃黏附法、尼龍毛分離法、E花環(huán)形成分離法等。由于單克隆抗體的應(yīng)用和免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展，可通過(guò)以下方法進(jìn)行分離。
1．免疫吸附分離法 將已知抗淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的抗體包被聚苯乙烯培養(yǎng)板，加入淋巴細(xì)胞懸液，表達(dá)相應(yīng)細(xì)胞表面標(biāo)志的淋巴細(xì)胞被貼附在培養(yǎng)板上，可與細(xì)胞懸液中其他細(xì)胞分開(kāi)。
2．磁珠分離法（immune magnetic bead, IMB） 近年來(lái)免疫磁珠法應(yīng)用較廣泛，是一種特異性分離所需淋巴細(xì)胞的方法。
3．熒光激活原代細(xì)胞分離儀分離法（fluorescence activated cell sorting, FACS） FACS又稱(chēng)流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry, FCM），是一種集光學(xué)、流體力學(xué)、電力學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)于一體，可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)定量測(cè)定和綜合分析方法。
磷酸化核纖層蛋白A/CIgG 人抗肝特異性脂蛋白(LSP)
磷酸化核因子2相關(guān)因子2IgG 人抗肝素PF4復(fù)合物/HIT(HIT)
磷酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑IgG 人抗肝腎微粒體(LKM)
磷酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑IgG 人抗肝膜(LMA)
磷酸化核因子κB激酶alpha抑制劑IgG 人抗肝可溶性抗原(SLA)
磷酸化核因子κB激酶alpha抑制劑IgG 人抗肝胞質(zhì)1型(LC1)
磷酸化核因子κB激酶alpha抑制劑IgG 人抗鈣調(diào)素特異(CAM-ab)
磷酸化核因子κB激酶beta抑制劑IgG 人抗鈣蛋白酶抑素(ACAST-DⅣ)ELISA it
原代細(xì)胞