化工儀器網(wǎng)
技術文章
干細胞適應無血清培養(yǎng)基的方法
閱讀：626 發(fā)布時間：2018-5-15目前，血清仍是干細胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。
為了使細胞適應無血清培養(yǎng)，關鍵的是將所培養(yǎng)細胞：
1.處于對數(shù)生長中期
2.>90% 活細胞率
3.適應時以較高的起始細胞接種
以下是細胞適應無血清培養(yǎng)基的使用方法：
*、直接適應——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應無血清培養(yǎng)基。
第二、連續(xù)適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應相比較，連續(xù)適應趨向?qū)τ诩毎訙睾鸵恍?/p>
（1）以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25％SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。
（2）當細胞密度>5×105細胞/ml時，以2×105到3×105細胞/ml細胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
（3）以2×106到3×106細胞/ml細胞密度，25％有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。 （4）當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
（5）每隔3到5天，當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。
在實驗后這些干細胞一般不再繼續(xù)保留，很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細胞，種子細胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細胞的特性不發(fā)生變化。
Saccharin 200mg 糖精標準品 1981/7/2
Gibberellic Acid 200mg 赤霉酸標準品 1977/6/5
Galantamine Hydrobromide 200mg 氫溴酸加蘭他敏標準品 1953/4/4
Procaine Hydrochloride 200mg 鹽酸普魯卡因標準品 1951/5/8
Metharbital CIII 200mg 美沙比妥標準品 1950/11/3
200mg 阿立哌唑標準品
Almotriptan Malate 200mg 阿莫曲坦標準品
200mg 波生坦標準品
干細胞