重組HEK293細胞表達狨猴（Macaca fascicularis）GPRC5D（孤兒G蛋白偶聯(lián)受體，C類群5成員D，登錄號XP_005570250.1），受CMV啟動子控制。

背景

孤兒G蛋白偶聯(lián)受體，C類群5成員D（GPRC5D）是一種s黃酸誘導蛋白，具有七個跨膜片段和一個短的N末端細胞外區(qū)域。GPRC5D在多發(fā)性骨髓瘤細胞中的強烈和選擇性表達，與B細胞成熟抗原（BCMA）的表達模式相似，使其成為治療多發(fā)性骨髓瘤的有希望的靶點。預計GPRC5D將成為多發(fā)性骨髓瘤免疫療法中CAR T細胞的替代靶點。

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應用

1. 狨猴GPRC5D結合實驗；篩選GPRC5D配體和抗體。

2. 作為抗GPRC5D CAR-T開發(fā)的靶細胞。

細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細胞的小瓶大約60秒。細胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部內容轉移到含有10 ml預熱的解凍培養(yǎng)基1（不含潮霉素B）的試管中。在37°C水浴中放置細胞過久將導致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細胞在5 ml預熱的解凍培養(yǎng)基1（不含潮霉素B）中重懸。

3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時后，檢查細胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基1（不含潮霉素B），并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在w全融合前傳代。在s次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1C（含潮霉素B）。

細胞傳代

1. 抽去培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養(yǎng)基1C并轉移到試管中。以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細胞在含潮霉素B的生長培養(yǎng)基1C中重懸。按照每周1:5的期望亞培養(yǎng)比例將細胞種入新的培養(yǎng)容器中。

細胞冷凍

1. 抽去培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養(yǎng)基1C并計數(shù)細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細胞在4°C冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796，或10% DMSO + 90% FBS）中重懸，細胞濃度約為2 x 10^6個細胞/ml。

4. 將1 ml的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下保存過夜。

5. 次日將小瓶轉移到液氮中保存。

注意：建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。

圖1. 利用流式細胞儀分析狨猴GPRC5D HEK293細胞系表面GPRC5D的表達。

狨猴GPRC5D HEK293細胞（藍色）或對照HEK293細胞（綠色）使用GPRC5D APC偶聯(lián)抗體（R&D Systems, #FAB6300A）染色，并通過流式細胞儀分析GPRC5D的表達。

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Products Catalog # Size

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