雌二醇（E2或17β-雌二醇）是由卵巢產(chǎn)生的一種雌性激素，腎上腺皮質(zhì)和睪丸也會產(chǎn)生少量。它是有效的女性性激素，對于維持正常的女性功能至關(guān)重要。在發(fā)情周期中，該周期可以分為四個階段（前發(fā)情期、發(fā)情期、間情期、休情期），雌二醇濃度從間情期逐漸上升至前發(fā)情期，在發(fā)情期降至幾乎無法檢測的水平。前發(fā)情期的中午時分達到最大濃度（1,2）。除了對性特征的影響外，它對大腦的生長和發(fā)育也有重要影響（3,4）。在雌性嚙齒動物中，雌二醇的測定是評估和監(jiān)測生殖功能和妊娠狀態(tài)的有用標志。

雌二醇大鼠ELISA是一種競爭性免疫分析，用于大鼠血清中雌二醇的定量測量。僅供研究使用。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品雌二醇大鼠ELISA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

雌二醇大鼠ELISA, 96孔檢測原理：

雌二醇大鼠ELISA試劑盒是一種基于競爭性結(jié)合原理的固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。微量滴定孔涂有抗雌二醇抗體。樣品中存在的未知量的雌二醇與雌二醇-辣根過氧化物酶偶聯(lián)物競爭與包被抗體的結(jié)合。孵育后，未結(jié)合的結(jié)合物被洗掉。結(jié)合的過氧化物酶結(jié)合物的量與樣品中雌二醇的濃度成反比。加入底物溶液后，顯色強度與樣品中游離雌二醇的濃度成反比。

一般說明

? 使用前必須讓所有試劑和樣本達到室溫。所有試劑混合時不得產(chǎn)生泡沫。

? 一旦開始測試，所有步驟都應(yīng)連續(xù)完成，不得中斷。

? 為避免交叉污染，每個標準品、對照品或樣本都應(yīng)使用新的一次性塑料移液器槍頭。

? 吸光度是孵育時間和溫度的函數(shù)。開始檢測前，建議所有試劑準備就緒，移除蓋子，所有需要的孔位固定在支架中等。這將確保每個移液步驟的間隔時間相等，且無中斷。

? 作為一般規(guī)則，酶促反應(yīng)與時間和溫度成正比。

? 嚴格遵守本使用說明書中規(guī)定的孵育時間。

? 建議對校準品、對照品和樣本進行雙重測定，以識別可能的移液錯誤。

? 每次運行都必須建立標準曲線。

? 微孔板洗滌很重要。洗滌不當?shù)目讜a(chǎn)生錯誤的結(jié)果。建議使用多通道移液器或多步移液器，或自動微孔板洗滌系統(tǒng)。在孵育之間不要讓孔干燥。在沖洗和抽吸過程中不要刮傷包被的孔。仔細沖洗和填充所有試劑。在沖洗時，檢查所有孔是否都精確地填充了洗滌液，孔中是否有殘留物。

檢測程序

1. 準備足夠數(shù)量的微孔板孔，以容納雙重測定的標準品和樣本。

2. 使用新的一次性槍頭，向相應(yīng)的孔中分配75 ?L的每個校準品和樣本。

3. 向每個孔中分配50 ?L的孵育緩沖液。

4. 在室溫（18-25°C）下，在板式搖床上（900轉(zhuǎn)/分鐘）孵育120分鐘。重要說明：此檢測中的最佳反應(yīng)明顯依賴于微孔板的搖動！

5. 使用前，將酶結(jié)合物濃縮物以1:100的比例稀釋于酶結(jié)合物稀釋液中。向每個孔中加入50 ?L稀釋后的酶結(jié)合物。

6. 在室溫（18-25°C）下，在板式搖床上（900轉(zhuǎn)/分鐘）孵育60分鐘。重要說明：此檢測中的最佳反應(yīng)明顯依賴于微孔板的搖動！

7. 丟棄孔中的內(nèi)容物，并用稀釋的洗滌液（每個孔300?L）沖洗孔4次。通過將微孔板輕敲在吸水紙上，盡可能去除洗滌液。

8. 向每個孔中加入200 ?L的底物溶液。

9. 在黑暗中不搖動孵育30分鐘。

10. 通過向每個孔中加入50 ?L的停止液來終止反應(yīng)。

11. 測定每個孔在450 nm處的吸光度。建議在加入停止液后15分鐘內(nèi)讀取孔的吸光度。

文獻參考：

1. Abubakar A. Shaikh. Estrone and estradiol levels in the ovarian venous blood from rat duringthe estrous cycle and pregnancy; Biology of Reproduction (1971); 5, 297 - 307.

2. Hawkins, R.A, Freedman, A., Marshall, A., Killen, E. Oestradiol-17β and prolactin levels in ratperipheral plasma; Br. J. Cancer (1975); 32, 179.

3. Zamani, M.R, Desmond, N.L, Levy, W.B.. Estradiol modulates long term synaptic depression infemale rat hippocampus. J. Neurophysiol (2000); 84: 1800 - 1808.

4. McCarthy, M.M. Estradiol and the developing brain; Physiol. Rev. (2008); 88: 91-134.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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